2023年7月27日发(作者：)

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乳化PCR扩增技术检测土壤中的典型病原菌

作者：刘燕 孙学明 邹晓琳

来源：《中国科技博览》2016年第23期

[摘 ;要]研究可以提高PCR扩增效率，改善多重PCR多引物检测易产生引物二聚体等的不足，乳化PCR扩增技术检测土样中有代表性的病原菌的反应参数和条件进行研究，改善多重PCR扩增检测易生成引物二聚体等方面的不足，提高PCR扩增效率。

[关键词]gyrB基因 ;PCR扩增 ;土壤 ;典型病原菌

中图分类号：TH113.22 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）23-0082-01

引言

近年来较多研究报道[1]均指出乳化PCR扩增技术可以弥补多重PCR技术的不足，特别是易生成引物二聚体这一不足。利用乳化PCR扩增技术的这一优势，将其与基因芯片的检测技术联用，应用于Y染色体的检测[2]。

1 材料与方法

1.1 土壤样品的采集及预处理

研磨过筛（20目筛），-80°C保存备用。

1.2 供试病原菌菌株

大肠杆菌：ATCC 25922;沙门氏菌：副伤寒沙门氏菌50073、肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌ATCC50071;金黄色葡萄球菌：A号ATCC、MHATCC 25923;福氏志贺菌51302。

1.3 主要试剂及试剂盒

主要试剂及试剂盒：span80，tween80，tritonX-100，mineral oil，无水乙醚，Taq DNA聚合酶、dNTP、引物、50bp DNA Ladder、100 bp DNA Ladder（上海生工生物工程技术服务有限公司），琼脂糖（中国惠兴生化试剂有限公司），FastDNA？ SPIN Kit for Soil 试剂盒（MP

Biomedicals，Solon，OH，USA）。

1.4 主要仪器