2023年11月29日发(作者：三星手机报价参数)

农业开发与装备 2019年第10期试 验 研 究

高效液相色谱法测定磷酸替米考星中替米考星含量

吴春燕，邓亚婷，张 雯，马春芳，李 敏，陈建蓉

（宁夏兽药饲料监察所，宁夏银川 750011）

摘要：采用高效液相色谱法建立了兽药磷酸替米考星中替米考星

含量的测定。采用C18柱为固定相，以水：乙腈：磷酸二丁胺缓

冲液：四氢呋喃（795：125：25：55）为流动相，流速为1.0 mL/

min，检测波长为280 nm，柱温为25℃。按外标法以峰面积计算

含量。结果表明，在此色谱条件下，替米考星顺式反式分离度良

好，磷酸替米考星的线性范围在0.05～1 mg/mL内r

2

>0.999，平均

回收率大于99％，RSD＜1.0％。该方法分离效果好、精密度高、

回收率高和稳定性好，适用于磷酸替米考星中替米考星含量的测

定。

关键词：高效液相色谱法；磷酸替米考星；含量测定

0 引言

磷酸替米考星是替米考星磷酸盐，属于大环内酯类抗生素，

是治疗鸡慢性呼吸道感染的特效药物，对鸡支原体的抑制效果2.2.2 磷酸二丁胺缓冲液。取二丁胺16.8 mL，加磷酸溶液

强，优于同类的恩诺沙星类药物。岳永波等报道表明用磷酸替米

考星，按75 mg/L水的剂量（以替米考星计）饮水给药，连用3天，

能有效控制鸡支原体感染呼吸道感染，减轻内部器官损伤，改善2.2.3 12.5 mol/L氢氧化钠溶液。称取氢氧化钠50 g，加少量水快

饲料利用率。磷酸替米考星与替米考星相比，由于增加了磷酸基

团而显著增加了其水溶性，以致磷酸替米考星在将来的兽医临床2.2.4 磷酸稀释液。取水900 mL，加入磷酸5.71 g，用12.5 mol/

使用中将更加便捷。中国兽药典和国外药典均未收载“磷酸替

米考星”的质量标准，目前通过查新检索到农业部公告2172号、

2270、2440号、2445号收载了磷酸替米考星质量标准，为确保兽2.2.5 空白溶液。磷酸稀释液。

药产品质量安全，控制兽药产品质量，需要对该兽药产品的质量2.2.6 对照品溶液。精密称取替米考星对照品25 mg，置50 mL容

标准进行制修订。通过对4个公告的比较，并进行条件优化，建立

了高效液相色谱法测定磷酸替米考星中替米考星含量。

1 试验材料与方法

1.1 仪器

美国安捷伦1260Ⅱ高效液相色谱仪，紫外检测器；美国安捷

伦1100高效液相色谱仪，紫外检测器；梅特勒托利多仪器有限公2.3 方法学考察

司AX-205电子分析天平；梅特勒—托利多仪器有限公司FE28酸度2.3.1 专属性。精密量取空白溶液、对照品溶液和供试品溶液各

计。

1.2 试药与试剂

替米考星对照品，购自中国兽医药品监察所，批号为2.3.2 线性关系。精密称定替米考星对照品50 mg，置50 mL容

K0311805，含量为95.3％；乙腈，购自Fishow chemical，批号为

174491，色谱级；磷酸，购自天津市科密欧化学试剂有限公司，

批号为20170216，优级纯；四氢呋喃，购自天津市科密欧化学试

剂有限公司，批号为20180315，色谱级；二丁胺，购自国药集团

化学试剂有限公司，批号为T20111125，化学纯；氢氧化钠，购自

国药集团化学试剂有限公司，批号为20180224，分析纯。

1.3 供试品

D

磷酸替米考星，宁夏泰益欣生物科技有限公司生产，批号为

D18050703。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent Eclipse PlusC18色谱柱（4.6×250 mm，5 μm）；

Waters symmetry C18色谱柱（4.6×250 mm，5 μm）；流动相

为水：乙腈：磷酸二丁胺缓冲液：四氢呋喃（795：125：25：

55）；流速为1.0 mL/min；检测波长为280 nm；柱温为25℃；进样

量为10 μl。

2.2 溶液的配制

2.2.1 磷酸溶液（1→10）。取磷酸10 mL，缓缓注入适量水中，

待冷却至室温，加水定容至100 mL，摇匀即得。

（1→10）70 mL，边加边搅拌，放置冷却后，用磷酸调节pH值至

2.5±0.1，加水至100 mL，摇匀即得。

速搅拌使溶解，放置冷却后用水定容至100 mL，摇匀，即得。

L氢氧化钠溶液调节pH值至2.5±0.1，加水至1000 mL，摇匀，即

得。

量瓶中，加乙腈10 mL，超声使溶解，再用磷酸稀释液稀释至刻

试 验 研 究

农业开发与装备 2019年第10期

表1 色谱图记录

添加量80％（20 mg）100％（25 mg）120％（30 mg）

替米考星含量（mg）19.8820.0719.9025.5826.1425.3029.9329.9829.91

回收率（％）99.2599.8099.60100.03100.9699.5299.5699.7399.46

平均回收率（％）99.55100.1799.58

RSD（％）0.30.70.1

表2 重复性试验结果

供试品编号（n）12345 6 平均值 RSD（％）

替米考星含量（％）79.96％79.17％79.80％79.97％78.45％ 79.53％ 79.48％ 0.7％

表3 不同人员不同仪器含量测定结果

测定人员人员甲人员乙

替米考星含量（％）78.67％79.15％78.37％78.27％78.47％78.35％78.90％78.98％

平均值（％）78.61％78.68％

RSD（％）0.1％

y=11813.02698x+27.46919，r＝0.99996。实验结果表明，替米考溶解供试品，减少了四氢呋喃、乙腈的用量，在对照品处理方法

2

星在0.05 mg/mL～1 mg/mL范围内线性关系良好。中，加入了少量乙腈，目的是起到助溶的作用。

2.3.3 准确度。取供试品磷酸替米考星25 mg，精密称定，称取9

份，分别加入精密称定的替米考星对照品20 mg、25 mg、30 mg各3良好，在0.05 mg/mL～1 mg/mL范围内线性关系良好（r

份，置于50 mL容量瓶中，加磷酸稀释液溶解并定容至刻度，制备

出浓度为80％、100％、120％的供试品溶液，将每个浓度的供试

品溶液过滤到样品瓶中，依次编号为1、2、3、4、5、6、7、8、

9。精密量取各溶液10 μl注入色谱仪，记录色谱图，见表1，平均

回收率大于99％，说明检测方法准确度良好。

2.3.4 精密度。重复性试验。精密称取6份供试品，照2.2.7项下

方法制备供试品溶液，测定供试品溶液中替米考星的含量，见表

2，RSD小于1.0％，说明重复性良好。

中间精密度试验。由甲、乙二人，分别取2分供试品，照2.2.7

项下方法制备供试品溶液，不同仪器测定供试品溶液中替米考星

的含量，结果如表3，RSD小于1.0％，说明精密度良好，见表3。

2.3.5 耐用性试验。考察不同的色谱柱、流速、流动相pH值和

柱温对含量测定的影响，照2.2.7项下方法制备供试品溶液，测定

供试品溶液中替米考星的含量，结果显示，在不同色谱柱、流

速、流动相pH值和柱温条件下，含量测定基本不受影响。

3 讨论与结论

3.1 方法验证

通过对磷酸替米考星含量测定方法进行优化，并进行专属

性、线性关系、准确度、精密度、耐用性的验证，该方法分离效

果好、回收率高、稳定性好，能够对磷酸替米考星的质量进行有

效控制。

3.2 流动相比例的考察

试验在进行条件优化之前，按照四个公告中的方法分别对样

品进行含量测定，发现磷酸替米考星中替米考星顺式反式分不开

或峰型拖尾严重，当流动相采用水-乙腈-磷酸二丁胺溶液-四氢呋

喃（795：125：25：55）的比例时，磷酸替米考星中替米考星顺

式反式分离度良好，峰型对称且无拖尾现象。

3.3 供试品溶剂的考察

通过到宁夏泰瑞制药有限公司及宁夏泰益欣药业有限公司

的实地调研，结合2172、2270、2240、2455号公告，考虑到经济

环保，四氢呋喃对人体的危害、对色谱柱的腐蚀作用，并且在确

保能控制产品质量的基础上，选择最优的方法，采用磷酸稀释液

在此色谱条件下，磷酸替米考星中替米考星顺式反式分离度

2

>0.999），

按外标法以峰面积计算进行检测，在20～30 mg添加量范围内，方

法回收率在99.9％～101.0％，RSD均小于1.0％，重复性的RSD小

于1.0％，中间精密度的RSD小于1.0％，稳定性的RSD小于1.0％，

耐用性中经过改变色谱柱、流速、流动相pH值、柱温条件检测

磷酸替米考星中替米考星含量，含量的RSD均小于1.0％。结果

表明，该方法分离效果好、回收率高和稳定性好，适用于磷酸替

米考星中替米考星含量的测定。通过优化试验条件，可进一步完

善检验方法，提高检验标准的稳定性和可靠性，同时完善国家兽

药质量标准体系，促进生产工艺改进，确保磷酸替米考星产品质

量，提高产品国际国内市场竞争力，推进兽药产业健康发展。

4 结语

磷酸替米考星是替米考星磷酸盐，是治疗鸡慢性呼吸道感

染的特效药物，对鸡支原体的抑制效果强，优于同类的恩诺沙星

类药物。通过对4个公告的比较，并进行条件优化，建立了高效

液相色谱法测定磷酸替米考星中替米考星含量。采用高效液相色

谱法，采用C18柱为固定相，以水：乙腈：磷酸二丁胺缓冲液：

四氢呋喃为流动相，按外标法以峰面积计算含量。在此色谱条件

下，替米考星顺式反式分离度良好，磷酸替米考星的线性范围在

0.05～1 mg/mL内r

2

>0.999，平均回收率大于99％，RSD＜1.0％。该

方法分离效果好、精密度高、回收率高和稳定性好，适用于磷酸

替米考星中替米考星含量的测定。

参考文献

[1] 范建华，何友义，韦玉勇，等.磷酸替米考星可溶性粉对人工感

染鸡毒支原体的疗效试验.中国兽药杂志[J].2014，48（6）：

58-61.

[2] 中国兽药杂志编辑部.磷酸替米考星[J].中国兽药杂志，

2003，37（8）：49.

[3] 冷小红，李小萍，张彤.HPLC法测定磷酸替米考星可溶性粉中

磷酸替米考星的含量[J].中国兽药杂志，2014，48（7）：

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