2024年5月12日发(作者：天龙八部官网)

碧云天网站

微信公众号

碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology

订货热线：400-168-3301或800-8283301

订货e-mail：******************

技术咨询：*****************

网址：

活性氧检测试剂盒

产品编号

S0033S

S0033M

产品名称

活性氧检测试剂盒

活性氧检测试剂盒

包装

>100次

>500次

产品简介：

 活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也称ROS Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的

试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH

不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF

的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。

 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种混合物(compound mixture),浓度为50mg/ml。

 本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

 本试剂盒S0033S包装可以测定100-500个样品，S0033M包装可以测定500-2500个样品。

包装清单：

产品编号

S0033S-1

S0033S-2

—

产品名称

DCFH-DA (10mM)

活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/ml)

说明书

包装

0.1ml

1ml

1份

产品编号

S0033M-1

S0033M-2

—

产品名称

DCFH-DA (10mM)

活性氧阳性对照(Rosup, 50mg/ml)

说明书

包装

0.5ml

5ml

1份

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。

注意事项：

 探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

 探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF的

激发光谱和发射光谱请参考下页图谱。

 尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外)，以减少各种可能的误差。

 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1. 装载探针

对于刺激时间较短(通常为2小时以内)的细胞，先装载探针，后用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞。对于细胞

刺激时间较长(通常为6小时以上)的细胞，先用活性氧阳性对照或自己感兴趣的药物刺激细胞，后装载探针。

原位装载探针：本方法仅适用于贴壁培养细胞。按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。去除

细胞培养液，加入适当体积稀释好的DCFH-DA。加入的体积以能充分盖住细胞为宜，通常对于六孔板的一个孔加入稀释好

的DCFH-DA不少于1毫升。37ºC细胞培养箱内孵育20分钟。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内

的DCFH-DA。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性氧水平。

收集细胞后装载探针：按照1:1000用无血清培养液稀释DCFH-DA，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的

DCFH-DA中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，37ºC细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细

胞充分接触。用无血清细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的DCFH-DA。直接用活性氧阳性对照或自己感

兴趣的药物刺激细胞，或把细胞等分成若干份后刺激细胞。通常活性氧阳性对照在刺激细胞20-30分钟后可以显著提高活性

氧水平。

说明：仅在阳性对照孔中加入Rosup作为阳性对照，其余孔不必加入Rosup。

2. 检测

对于原位装载探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪

检测。对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测，用激光共聚焦显微镜直接

观察也可以。

3.

参数设置

使用488nm激发波长，525nm发射波长，实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。DCF的荧光光谱和FITC非常相似，可以

用FITC的参数设置检测DCF。DCF的激发光谱和发射光谱参考下图。

4.

其它说明

阳性对照可以按照1:1000的比例使用。例如装载好探针的细胞共1毫升，可以加入1微升的阳性对照刺激。通常刺激后20-30

分钟内可以观察到非常显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激

后30分钟内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧

阳性对照的浓度。

另外，对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000稀释DCFH-DA，使装载探

针时DCFH-DA的浓度为2-5微摩尔/升。

探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。

活性氧阳性对照(Rosup)仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。

使用本产品的文献：

1. Jia SJ, Jiang DJ, Hu CP, Zhang XH, Deng HW, Li YJ.

Lysophosphatidylcholine-induced elevation of asymmetric dimethyl

arginine level by the NADPH oxidase pathway in endothelial cells.

Vascul Pharmacol. 2006 Mar;44(3):143-8.

2. Li JJ, Tang Q, Li Y, Hu BR, Ming ZY, Fu Q, Qian JQ, Xiang JZ. Role of

oxidative stress in the apoptosis of hepatocellular carcinoma induced by

combination of arsenic trioxide and ascorbic acid. Acta Pharmacol Sin.

2006 Aug;27(8):1078-84.

3. Tian YY, An LJ, Jiang L, Duan YL, Chen J, Jiang B. Catalpol protects

dopaminergic neurons from LPS-induced neurotoxicity in mesencephalic

neuron-glia cultures. Life Sci. 2006 Dec 23;80(3):193-9.

4. Man Y, Ding L, Guo H, Wang L, Wang S, Li J. In vitro exper iment of

danshen root and carthamus tinctorius extract in the protection of

endothelial cells from oxidative damage. Chin J Clin Rehab. 2006;

10(39):119-122.

5. Yang ZC, Xia K, Wang L, Jia SJ, Li D, Zhang Z, Deng S, Zhang XH,

Deng HW, Li YJ. Asymmetric dimethylarginine reduced erythrocyte

deformability in streptozotocin-induced diabetic rats. Microvasc Res.

2007 Mar;73(2):131-6.

6. Ye CL, Jin YL, Ye KH, Qin L. Effects of EGb 761 on the cell apoptosis

induced by H2O2 in RIN-m beta cells. Zhong Yao Cai. 2007 Apr;

30(4):424-8.

7. Gao MQ, Guo SB, Chen XH, Du W, Wang CB. Molecular mechanisms

of polypeptide from Chlamys farreri protecting HaCaT cells from

apoptosis induced by UVA plus UVB. Acta Pharmacol Sin. 2007 Jul;

28(7):1007-14.

8. Tian YY, Jiang B, An LJ, Bao YM. Neuroprotective effect of catalpol

against MPP(+)-induced oxidative stress in mesencephalic neurons. Eur J

Pharmacol. 2007 Jul 30;568(1-3):142-8.

9. Fan J, Cai H, Tan WS. Role of the plasma membrane ROS-generating

NADPH oxidase in CD34+ progenitor cells preservation by hypoxia. J

Biotechnol. 2007 Jul 15;130(4):455-62.

10. Zha RP, Xu W, Wang WY, Dong L, Wang YP. Prevention of

lipopolysaccharide-induced injury by 3,5-dicaffeoylquinic acid in

endothelial cells. Acta Pharmacol Sin. 2007 Aug;28(8):1143-48.

11. Chen YR, Nie SD, Shan W, Jiang DJ, Shi RZ, Zhou Z, Guo R, Zhang Z,

Li YJ. Decrease in endogenous CGRP release in nitroglycerin tolerance:

role of ALDH-2. Eur J Pharmacol. 2007 Sep 24;571(1):44-50.

12. Jiang B, Du J, Liu JH, Bao YM, An LJ. Catalpol attenuates the

neurotoxicity induced by beta-amyloid(1-42) in cortical neuron-glia

cultures. Brain Res. 2008 Jan 10;1188:139-47.

13. Zhang GG, Shi RZ, Jiang DJ, Chen YR, Jia-Chen , Tang ZY, Bai YP,

Xiao HB, Li YJ. Involvement of the endothelial DDAH/ADMA pathway

in nitroglycerin tolerance: the role of ALDH-2. Life Sci. 2008 Mar

26;82(13-14):699-707.

14. Zhao Y, Lu N, Li H, Zhang Y, Gao Z, Gong Y. High glucose induced

human umbilical vein endothelial cell injury: involvement of protein

tyrosine nitration. Mol Cell Biochem. 2008 Apr;311(1-2):19-29.

15. Li Y, Bao Y, Jiang B, Wang Z, Liu Y, Zhang C, An L. Catalpol protects

primary cultured astrocytes from in vitro ischemia-induced damage. Int J

Dev Neurosci. 2008 May-Jun;26(3-4):309-17.

16. An R, Dong C, Lei Y, Han L, Li P, Chen J, Wang G, Shi Q, Gao C, Jiang

H, Zhou W, Han J, Chu Y, Dong X. PrP mutants with different numbers

of octarepeat sequences are more susceptible to the oxidative stress. Sci

China C Life Sci. 2008 Jul;51(7):630-9.

17. Chen M, Li Y, Yang T, Wang Y, Bai Y, Xie X. ADMA induces monocyte

adhesion via activation of chemokine receptors in cultured THP-1 cells.

Cytokine. 2008 Aug;43(2):149-59.

18. Fan J, Cai H, Yang S, Yan L, Tan W. Comparison between the effects of

normoxia and hypoxia on antioxidant enzymes and glutathione redox

state in ex vivo culture of CD34(+) cells. Comp Biochem Physiol B

Biochem Mol Biol. 2008 Oct;151(2):153-8.

19. Bi J, Wang XB, Chen L, Hao S, An LJ, Jiang B, Guo L. Catalpol protects

mesencephalic neurons against MPTP induced neurotoxicity via

attenuation of mitochondrial dysfunction and MAO-B activity. Toxicol In

Vitro. 2008 Dec;22(8):1883-9.

20. Guan L, Han B, Li Z, Hua F, Huang F, Wei W, Yang Y, Xu C. Sodium

selenite induces apoptosis by ROS-mediated endoplasmic reticulum

stress and mitochondrial dysfunction in human acute promyelocytic

leukemia NB4 cells. Apoptosis. 2009 Feb;14(2):218-25.

21. Zhou YJ, Zhang SP, Liu CW, Cai YQ. The protection of selenium on

ROS mediated-apoptosis by mitochondria dysfunction in cadmium-

2 / 12 S0033 活性氧检测试剂盒 400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime