2024年5月4日发(作者：)

第57卷第2期

2021年2月

doi:10.11707/j.1001-7488.20210209

林

SCIENTIA

业科

SILVAE

学

SINICAE

Vol.57,No.2

Feb.,2021

大花黄牡丹花粉萌发及贮存特性

∗

贾文庆

1

　王艳丽

1

　郭英姿

2

　

　

王　政

2

　齐　庆

1

　闫三妮

3

　

刘会超

1

　何松林

1

2.河南农业大学风景园林与艺术学院　郑州450002;　3.洛阳国家牡丹园　洛阳471011)

(1.河南科技学院　河南省园艺植物资源利用与种质创新工程研究中心　新乡453003;

摘　要:　【目的】明确大花黄牡丹花粉萌发准确测定的方案,比较不同贮存条件和处理温度对花粉寿命的影响,

确定花粉短期、中期、长期贮存的适宜温度,阐明不同温度下花粉程序性死亡的生理原因,为杂交育种、种质资源保

存提供试验及理论依据。【方法】以西藏特有的大花黄牡丹花粉为材料,采用扫描电镜(SEM)观察分析花粉的形

态,利用离体培养法研究花粉的萌发特性,并探讨不同贮存温度对花粉寿命,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶

(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性,及丙二醛(MDA)和抗坏血酸(AsA)含量的影响。【结果】大花黄牡丹自然环境

下花粉饱满率高,畸形率仅为5.6%,具有较强的有性生殖能力;影响大花黄牡丹花粉萌发的因子依次为蔗糖>硼

酸>CaCl

2

>GA

3

;室温下贮存花粉寿命仅为24天,4℃下花粉寿命80天左右,

-

20℃花粉寿命为120~184天,

烈变化前后花粉萌发率出现快速下降,

-

196℃贮存期间,SOD、CAT、POD、AsA含量保持稳定,清除活性氧能力较

强,无细胞凋亡现象发生;相关分析结果显示,SOD活性是贮存期间影响大花黄牡丹花粉寿命的最主要生理因子,

膜质过氧化是导致花粉死亡的主要生理因素;室温下POD为敏感性保护酶,4℃下SOD、CAT是敏感性保护酶,

含量>POD。【结论】大花黄牡丹花粉饱满率与萌发率具有相关性;适宜大花黄牡丹花粉萌发率检测的培养基为

120g·L

1

蔗糖

+

45mg·L

1

硼酸

+

55mg·L

---

1

-

80℃下花粉的寿命超过1年,

-

196℃花粉贮存1年后萌发率无显著变化;花粉保护酶、丙二醛含量、AsA含量剧

-

20℃、

-

80℃下,SOD为敏感性保护酶;3种保护酶活性及AsA含量对花粉萌发率的影响次序为SOD>CAT>AsA

GA

3

+

30mg·L

-

1

粉24天以内的短期贮存,4℃、

-

20℃适合杂交时间间隔在80~120天花粉的中期贮存,

-

80℃适合花粉的跨年贮

存,

-

196℃适宜花粉的长期贮存;

-

196℃下贮存后花粉细胞内代谢处于平衡状态,细胞膜系统稳定是花粉保持高

萌发率的生理响应;花粉在室温、4℃、

-

20℃、

-

80℃下贮存后,活性氧、自由基过度积累造成的细胞膜质过氧化、

损伤是花粉萌发率降低的主要原因。

关键词:　大花黄牡丹;花粉萌发率;花粉寿命;花粉贮存;保护酶;丙二醛;抗坏血酸

中图分类号:S718.43　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001

-

7488(2021)02

-

0082

-

11

CaCl

2

,花粉萌发率达92.10%;室温适合大花黄牡丹花

CharacterizationofPollenGerminationandStorageofPaeonialudlowii

JiaWenqing

1

　WangYanli

1

　GuoYingzi

2

　WangZheng

2

　QiQing

1

　YanSanni

3

　LiuHuichao

1

　HeSonglin

1

(rovinceEngineeringResearchCenterofHorticulturalPlantResourceUtilizationandGermplasmEnhancement

HenanInstituteofScienceandTechnology　Xinxiang453003;　eofLandscapeArchitectureandArt,

HenanAgriculturalUniversity　Zhengzhou450002;　gNationalPeonyGarden　Luoyang471011)

Abstract:　【Objective】OptimizationofaninvitrogerminationprotocoltoeffectivelydeterminetheviabilityofPaeonia

ludlowiipollen,theeffectsofdifferentstorageconditionsandincubationtemperatureonpollenlongevitywerecomparedto

determinetheappropriatetemperatureforpollenstorageintheshort,midandlongterm,andthephysiologicalmechanism

iipollenatdifferentstoragetemperatureswasanalyzed,soastoprovideabasisfor

crossbreedingandgermplasmresourceconservation.【Method】iifromTibetwasusedto

culturetoinvestigatetheeffectsofdifferentstoragetemperaturesandtimesonpollenviabilityandactivityofsuperoxide

收稿日期:2020

-

03

-

27;修回日期:2020

-

05

-

27。

基金项目:国家重点研发计划项目“主要花卉野生资源精准鉴定及特异性状基因挖掘”(2018YFD1000401);河南省科技发展计划项目

“牡丹染色体加倍关键技术研发及三倍体种质创制”(2)。

∗何松林为通讯作者。

examinepollenmorphologybyscanningelectronicmicroscope(SEM).Pollengerminationwascharacterizedbyinvitro

　第2期贾文庆等:大花黄牡丹花粉萌发及贮存特性

83

dismutase(SOD),peroxidase(POD),andcatalase(CAT),aswellasthecontentsofascorbicacid(AsA)and

malondialdehyde(MDA).【Result】iiishighunderthenaturalconditions,and

thedeformityrateisonly5.6%,torsinfluencingthepollen

germinationwereasfollows:sucrose>boricacid>CaCl

2

>GA

3.

Thelongevityofpollenstoredatroomtemperaturewas

120

-

lenlongevityforstorageat

-

80℃wasoveroneyear,andthesuitabletemperatureforlong-term

ofpollenprotectiveenzyme,,CAT,PODactivitiesandAsAcontentat

-

196℃

only24days,thelongevityofpollenstoredat4℃wasabout80days,andthelongevityofpollenstoredat

-

20℃was

preservationofpollenwasat

-

196℃.Thegerminationrateofpollendecreasedrapidlybeforeandafterthedrasticchanges

rationanalysisshowedthatSODactivitywas

themostimportantphysiologicalfactorthataffectedthepollenlongevityduringstorage,andmembraneperoxidationwas

eeprotectiveenzymesandAsAunderdifferentstorage

temperatureshaddifferenteffects:PODservedasasensitiveprotectiveenzymeatroomtemperature,SODservedasa

4℃.TheorderoftheeffectsofthreeprotectiveenzymeactivitiesandAsAcontentonpollengerminationratewasas

follows:SOD>CAT>AsA>POD.【Conclusion】Therateofpollenplumpnesswascorrelatedwiththegerminationrate.

ThehighestgerminationrateinPaeonialudlowiiwasabout92.10%ofthepollentreatedwith120g·L

L

-

1

-

1

sensitiveprotectiveenzymeat

-

20℃and

-

80℃,whereasbothSODandCATservedassensitiveprotectiveenzymesat

iipollenwithin24days,4℃,

-

20℃weresuitableforthemid-termstorageofpollenin80

-

120days.

-

80℃

--

boricacid

+

55mg·L

1

GA

3

+

30mg·L

1

CaCl

2

.Theroomtemperaturewassuitablefortheshort-termstorageof

sucrose

+

45mg·

wassuitablefortransannualstorageofpollen,and

-

196℃eration

andremovalofreactiveoxygenspecieswithinpollencellswereatanequilibriumwhenthepollenwasstoredat

-

196℃,

andthestabilityofcellmembranesystel

membraneperoxidationanddamagecausedbyexcessiveaccumulationofreactiveoxygenspeciesandfreeradicalswerethe

mainreasonsforthedecreaseofpollengerminationrateafterstorageatroomtemperature,4℃,

-

20℃and

-

80℃.

Keywords:　Paeonialudlowii;pollengermination;pollenlongevity;pollenstorage;protectiveenzymes;MDA;AsA

　　

(Paeoniaceae)芍药属(Paeonia)牡丹组(Sect.

大花黄牡丹(Paeonialudlowii)为芍药科

牡丹现已确认的9种野生种质及居群分布在华

北、西北、西南、华中等地区,区域跨度大,花期存在

较大差异,杂交需要贮存花粉,花粉低温或超低温贮

存能够延长花粉的寿命,是随时随地为授粉杂交提

供足量可育花粉的有效方法,检测花粉萌发率是远

缘杂交前的基础性工作,花粉离体萌发技术是评价

花粉萌发率以及花粉是否贮存成功的可靠手段

etal.,2018;Lietal.,2019)。近年来,越来越多的

研究发现,花粉贮存期间的萌发率与活性氧、自由基

的清除机制及膜质过氧化程度有关(谭健晖,2011;

2020),氧化应激引起的细胞损伤甚至细胞凋亡可

能是贮存花粉萌发率下降的主要原因之一(石印

等,2015;徐瑾等,2015;Renetal.,2020)。以往

关于大花黄牡丹的研究主要集中在分类学、生态学

(苏建荣等,2010;杨翔等,2010)、遗传学(林启冰

2005;曾秀丽等,2009)等方面,芍药属不同牡丹种

等,2004;唐琴等,2012)、孢粉学(何丽霞等,

质花粉萌发适宜的培养基差异较大(盖伟玲等,

刘艳萍等,2013;贾文庆等,2015;Liuetal.,

(Akhondetal.,2000;Shekarietal.,2016;Sorkheh

Moutan)肉质花盘亚组(yanae)落叶

大灌木,为西藏特有植物,自然仅在林芝、米林、隆子

县等有零星分布,生长势强,高达2~3.5m,是牡丹

最高大的种质,花鲜黄色,是金黄色牡丹品种来源的

主要亲本,秋叶红色,观赏价值极高;其根、花瓣入

药,为名贵的藏药之一(汪松等,2004)。大花黄牡

丹多数仅有1个心皮,结实率少,加之生境干扰严重

和人为盗掘毁坏等原因,致使其野生种群数量大幅

减少,处于濒危状态,现被列为国家二级保护植物

杨小林等,2007)。芍药属野生种质资源中仅有黄

牡丹()、大花黄牡丹具有

黄色的基因,栽培牡丹除紫斑牡丹(Paeoniarockii)、

杨山牡丹(Paeoniaostii)外,大多数种类植株低矮、

生长纤弱,黄色品种少,严重制约了牡丹的应用推

广。因此,研究分析大花黄牡丹花粉的贮存特性,对

于开展芍药属植物的种间杂交育种工作,培育具有

自主知识产权的株型高大、黄色系牡丹品种具有重

要意义。

(李嘉珏等,1998;洪德元等,1999;汪松等,2004;

2010;律春燕等,2010;贾文庆等,2012;施江等,

84

林业科学57卷　

2013)

育性情况

,王士泉

,但仅

等

限

(

于

2012)

用孔

报

雀

道

绿

了

-

大

醋

花

酸

黄

洋

牡

红

丹

测

花

定

粉

花

的

粉

生活力,而关于培养基成分对花粉萌发,不同贮存温

度对花粉寿命及细胞内生理指标的影响,尚未见报

道。因此,本试验以大花黄牡丹隆子县居群花粉为

试验材料,对其花粉萌发特性、低温下花粉的贮存特

性进行研究,并测定贮存期间抗坏血酸(AsA)含量

等生理指标的变化,旨在找出大花黄牡丹花粉短期、

中期和长期贮存的适宜温度,并明确贮存期间不同

温度下大花黄牡丹花粉萌发率降低的生理机制,为

进一步开展大花黄牡丹的杂交育种工作提供参考。

1.

1　

1　

材料与方法

试验材料

　

上中旬

　大花黄牡丹花粉采自西藏隆子县

9:00—11:00,采集含苞待放的

,2018

大花黄

年

牡

5月

丹

花朵,迅速放入冰盒,在实验室将花萼和花瓣剥去,

去除花柄,然后倒置放入培养皿中,置于(22±1)℃

培养箱内散粉,24h后取出花朵,左手用镊子夹住

倒置的花朵,右手用镊子轻弹,收集花药开裂散出及

掉落的花粉。将收集的花粉分成2份,一份直接用

于花粉萌发的测定;另一份30℃鼓风干燥箱干燥

24

盖离心管中盖口贮存

h后(含水量降至6.

,备用

5%±0.

。

5%),分装至2mL带

1.2　花粉萌发试验及花粉扫描电镜观察

　

础上

　在前期牡丹花粉萌发研究

,采用L

(贾文庆等,2020)基

对硼酸、蔗糖

9

、GA

(3

4

)正交试验设计,一个对照(表1),

3

试验,每培养基(5

、CaCl

2

进行4因素3水平的正交

g·L

-

1

琼脂,pH6.0)处理重复3

次。培养基配制后,分装至35mm一次性培养皿

中,冷却后,将1.1收集的新鲜花粉放入1mL蒸馏

水中,充分搅拌制成悬浮液,然后用滴管将悬浮液移

至培养基上,用涂布棒涂布均匀,然后放入盛有少量

水的大号培养皿里,加盖。置于25℃下恒温培养

18

观察

h后

200

,在

粒以上

光学显

,以花粉管长度大于花粉粒直径作

微镜下统计花粉萌发率,每样品

为花粉萌发标准。花粉饱满率观察方法如下:将

1.

粘有双

1收集的花

面导电

粉

胶

酒

的

精

圆

梯

形

度

电

脱

极

水

板

后

上

,将

,喷

花

金

粉

后

均

在

匀撒

日

在

立

SU-1510

的花粉比率

扫描电镜下观察花粉并进行拍照

。

,统计饱满

1.3　不同贮存温度对花粉萌发和花粉寿命的影响

试验

　

每份分装

　将1.1

20

所得的大花黄牡丹干燥花粉分成

~30个2mL带盖离心管(将花粉装入

5份,

放有1~3粒变色硅胶的离心管,每管1.2g左右花

粉,封口贮存),分别放在室温(地下室阴凉干燥处,

18

氮罐中

~25

,

℃

定期添加液氮

)、4℃、

-

20

)

℃

下贮存

、

-

80℃

。

、

贮存第

-

196℃

24、40、72、

(放入液

只离心管

120、184、264、365

,取少许花粉用

天后,分

2.

别

1

从

节最佳培养基检测萌

5种温度中取1~2

发率(冷冻下花粉经35℃水浴快速化冻),确定5

种温度下的花粉寿命(花粉寿命

=

花药散粉到萌发

率降低到50%时所经历的天数),其余花粉用于保

护酶活性等生理指标测定。

1.4　不同贮存温度对丙二醛(MDA)和抗坏血酸

(AsA)含量的影响试验

　

的试剂盒测定

　MDA含量采

:称取约

用北京

0.

索

100

莱宝

g

科

花粉

技有

,加入

限公

1

司

mL

提供

提

取液进行冰浴匀浆;8000

×

g4℃离心10min,取上

清,置冰上待测。混合液在100℃水浴中保温

60

10

min

色皿中

000

后

×

(盖紧,防止水分散失),置于冰浴中冷却,

,

g

测定各样品在

常温离心10min。

450nm、532

取上清至

nm

1

和

mL

600

玻璃比

nm处

的吸光度,换算出MDA含量。

体系参照李合生等

AsA含量测定成分提取方法与

(2000)的方法,采用分光光度计

MDA相同,反应

测定525nm处的吸光度值,根据制作的标准曲线确

定抗坏血酸的含量。

1.5　不同贮存温度对3种保护酶活性的影响试验

　

化物岐化酶

　酶液的

(

提

SOD)

取参

活性采用氮蓝四唑法测定

照贾文庆等(2020)方法。

,

超

过氧

氧

化物酶(POD)活性采用愈创木酚法测定,过氧化氢

酶(CAT)活性采用可见光分光光度法测定(李合生

等,2000)。

1.6　数据分析

　　采用EXCEL2016处理数据和作图,并利用

2.

2　

SPSS22.

1　

结果与分析

0进行方差分析、多重比较。

大花黄牡丹花粉萌发适宜培养基的筛选及花

粉饱满率观察

　

发率影响的研究结果

　不同正交组合处理培养基对大花黄牡丹花粉萌

(表1)表明,不同培养基条件

下花粉萌发率存在显著差异(P<0.01),其中处理5

萌发率最高,平均达92.10%,对照无任何添加物的

培养基萌发率最低,平均仅为23.50%,这表明大花

黄牡丹花粉虽然能够借助于自身积累的养分萌发,

但萌发率较低。采用EXCEL2016对花粉萌发率数

据进行直观分析,蔗糖、硼酸、CaCl

2

和GA

3

4因素的

　第2期贾文庆等:大花黄牡丹花粉萌发及贮存特性

85

极差(R)分别为23.78、19.86、6.78、6.34,可以确定

对花粉萌发的诱导效应表现为蔗糖>硼酸>CaCl

2

>

GA

3

。根据分析结果,确定大花黄牡丹花粉萌发的

--

开花3~8朵(图1A),秋叶猩红(图1B),每朵花的

花粉量平均干质量在(180±32)mg,果实多为单心

皮蓇葖果(图1C)。扫描电镜结果显示,畸形花粉有

勺形、三角形、不规则形等,总量较少,仅占观察花粉

总数的5.6%,花粉饱满率高达94.4%,饱满率与萌

发率基本符合(图1D、E)。

最优组合为120g·L

1

蔗糖

+

45mg·L

1

硼酸

+

55mg·

L

-

1

组合。统计观察发现,大花黄牡丹隆子县居群单株

GA

3

+

30mg·L

-

1

CaCl

2

,其萌发率显著高于其他

表1　不同培养基对大花黄牡丹花粉萌发率的影响

①

Tab.1　EffectsofdifferentmediumonpollengerminationofPaeonialudlowii

处理

Treatment

1

2

3

4

5

6

7

8

—

—

—

蔗糖

Sucrose/(g·L

-

1

)

90

90

120

120

120

150

150

150

65.77

82.97

56.44

23.78

0

90

硼酸

Boricacid/(mg·L

-

1

)

30

45

60

30

45

60

30

45

60

70.25

79.11

55.83

19.86

0

(mg·L

25

40

55

40

55

25

55

25

40

0

GA

3

/

-

1

)(mg·L

30

50

70

70

30

50

50

70

30

0

CaCl

2

/

-

1

)

萌发率

Germinationrate(%)

68.10±1.32dD

82.70±1.82cC

46.52±1.40h

86.50±0.11bB

92.10±1.30aA

56.15±0.10fF

70.32±0.10dD

62.52±1.87eE

K

1

K

2

K

3

R

10

950.66±1.20gG

66.98

73.29

64.92

6.34

70.29

69.72

65.18

6.78

23.50±1.13hH

　　①不同大小写字母分别表示在0.01、0.05水平上差异显著。下同。Thedatawithdifferentcapitalandlowercaselettersindicatesignificant

differenceat0.01,ebelow.

图1　大花黄牡丹植株状态及花粉饱满率

A.开花状态;B.示红叶;C.示单心皮;D,E.畸形花粉。ingstate;f;clewithonlyonecarpel;D,edpollen.

Fig.1　PlantstatusandpollenplumpnessrateofPaeonialudlowii

2.2　不同贮存温度对花粉寿命的影响

下花粉寿命大概为80天左右,第264天时花粉萌发

率降为0。

-

20℃、

-

80℃和

-

196℃贮存下花粉萌

发率下降趋势不同。

-

20℃下0~365天时,花粉萌

55%,贮存第184天,萌发率降为32%,说明

-

20℃

发率呈快速下降趋势,贮存第120天,花粉萌发率

下花粉寿命120~184天;

-

80℃下贮存,花粉萌发

率缓慢下降,而

-

196℃贮存下萌发率曲线保持平

缓,贮存第365天,

-

80℃花粉萌发率为62.10%,达

到贮存前花粉萌发率的66.23%,

-

196℃贮存下花

粉萌发率为92.1%,为贮存前萌发率的99.67%,这

表明

-

80℃和

-

196℃花粉寿命均大于1年,

　　花粉贮存是人工保存种质资源的重要手段。不

同贮存温度和处理时间对花粉萌发率的影响差异较

大(P<0.01)(图2),除

-

196℃外,其他4个贮存温

度下,大花黄牡丹花粉萌发率均随时间延长而下降。

室温下贮存花粉萌发率随时间延长迅速降低,说明

越来越多的花粉快速丧失发芽力,贮存24天花粉萌

发率47%,为贮存前新鲜花粉萌发率的50.87%;贮

存第72天时,萌发率降为0,花粉死亡,说明冷凉干

燥下花粉贮存寿命为24天。4℃贮存72天花粉萌

发率为49%,120天时萌发率降为15%,这说明4℃

86

林业科学57卷　

杂交的花粉贮存

-

196℃更适合花粉的长期贮存

。综上所述,大花黄牡丹花粉贮存

,而

-

80℃适合隔年

的最佳温度为

-

196℃。

图2　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉萌发的影响

Fig.2　Effectsofdifferent

pollen

storage

germination

temperatureandtimeon

2.3　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉

MDA含量的影响

　

大花黄牡丹花粉在不同贮存环境中

　MDA含量是花粉细胞膜质过氧化的重要指标

MDA含量变化

,

如图3所示。室温、4℃贮存,花粉MDA含量先升

高而后快速降低,室温下首先达到峰值,4℃下随后

出现高峰;室温下MDA含量变化相对较大,贮存72

天后,升高到24μmol·g

-

1

倍;4℃贮存184天,MDA

(

含量峰值达

FW),为贮存

20.

前

5

的

μmol

5.21

·

g

-

1

降,

(

推测可

FW);随后

能是

,2

花粉

个贮

细

存

胞

温

凋

度

亡

下

,MDA

MDA

分

含

解

量

造

迅

成

速

的

下

。

天时

-

20℃

MDA

下MDA

含量达到贮存前的

则呈现逐渐升高的趋势

4.49倍,

,

说明花粉细

贮存第365

胞膜质过氧化严重;而

-

80℃条件下,大花黄牡丹

花粉MDA含量呈缓慢上升的趋势,贮存第365天

1.

MDA含量升高到7.8μmol·g

-

1

(FW),为贮存前的

体稳定

69倍

,

;

贮存

-

196

365

℃下

天

,

后

大花黄牡丹花粉

,MDA含量与贮

MDA

存前

含量总

无显著

差异,这表明花粉细胞在

-

196℃贮存下并未造成膜

质过氧化,花粉萌发率高。

2.4　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉SOD

活性的影响

　

影响

　不同贮存

(P<0.01)

温

(

度

图

及

4A)

处

。

理

室温下贮存

时间对SOD

,

活

大花黄牡丹

性有显著

花粉SOD活性随时间延长总体呈迅速下降趋势,

SOD

花粉具有

活性的降低可能是花粉死亡较多

SOD活性造成的。4℃和

-

20

,只有少部分

℃下贮存,

SOD

此后随着贮存时间的延长

活性升高,分别在第24

,SOD

天、

活性迅速下降

第72天达到峰值

,4℃

,

下贮存第264天花粉萌发率降为0,SOD活性仅为

图3　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉丙二醛

含量的影响

Fig.3　Effectsof

MDA

different

content

storage

in

temperature

pollen

andtimeon

3U·g

-

1

为最高峰值的

(FW),

23.

-

20

90%,

℃下贮存第

这表明,

365

此时

天

SOD

,SOD

已不足以

活性仅

抵抗花粉膜质过氧化导致的伤害,花粉萌发率也出

现了大幅下降。

-

80℃贮存条件下,SOD活性呈先

缓慢上升随后下降再逐渐上升的趋势,但总体变化

幅度比较平缓,贮存第365天,SOD活性达到贮存前

的1.65倍,这表明大花黄牡丹花粉清除活性氧的能

力强,花粉仍具有较高活性。而

-

196℃液氮贮存条

件下,SOD活性基本保持稳定,贮存期间SOD活性

无显著变化,花粉萌发率与新鲜花粉无显著差异,

SOD活性124U·g

-

1

表明大花黄牡丹花粉细胞内代谢稳定

(FW),为贮存前的

,没有受到伤

1.07倍,这

害或伤害较小,因此花粉萌发率高。

2.5　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉POD

活性的影响

　

后

　

,POD

大花黄牡丹花粉经过不同贮存温度和时间处理

活性变化显著(P<0.01)(图4B)。花粉

室温下第

POD活性在室温

24天,POD

、4℃

活性升至

、

-

20℃下

59

,先升高而后降低

U·g

-

1

(FW),达到

。

最高,为原来的2.32倍,之后随着时间的增长,大花

黄牡丹花粉自身的保护能力迅速下降,POD合成受

到抑制,至贮存第264天,降为0;4℃贮存,大花黄

牡丹花粉的POD酶活性最高峰值出现在第72天,

之后随着时间增长,POD酶活性开始迅速下降,到

第264天时,活性仅为贮存前活性的8%;

-

20℃,

POD

粉萌发率的

活性最高峰值出现在第

下降而迅速下降,

120

贮存

天,

365

之后伴随着花

天,POD酶

活性仅为3.5U·g

-

1

性同样呈先升高后

(

下

FW)

降的

。

趋

-

80

势,

℃

最

贮存

高峰

,POD

出现

酶活

在第

184天,之后下降。

-

196℃贮存条件下,POD酶活

　第2期贾文庆等:大花黄牡丹花粉萌发及贮存特性

87

性整体波动较小,趋势平缓,365天时活性是原来的

1.

状态

04

,

倍

自由基产生较少

,这表明超低温

,

下

低

,花

POD

粉内

酶

部

活

代

性

谢

协

处

同

于

其

平

他

衡

保

护酶及其他成分等能够及时分解自由基,保证花粉

细胞内部代谢稳定,因而花粉活力较高。

2.6　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉CAT

活性的影响

　

0.

　

01)

不

(

同

图

贮

4C)

存

,

温

室温

度对

、4℃

CAT

、

-

20

活性

℃

的

贮存条件下

影响显著

,

(

大花

P<

黄牡丹花粉的CAT活性首先升高,分别在第24天、

第40天、第120天达到峰值,之后随着贮存时间的

延长,室温、4℃下花粉CAT活性迅速下降,分别在

贮存第264天和第365天降为0;

-

20℃下,在第

120

365

天花粉CAT

-

80

天

℃

,

贮存温度下

花粉CAT

活性达到峰值后快速下降

,

活

随着贮存时间的延长

性仅为24mg·g

-

1

,贮存第

丹花粉的CAT活性总体上呈起伏不定的

,大花黄牡

(FW)。

曲线,第

365天最高峰值达91mg·g

-

1

倍;

-

196℃贮存温度下,CAT

(

活性呈现震荡下降再

FW),为原来的1.25

上升而后下降的趋势,但幅度极为平缓,与贮存前无

显著差异。这表明随着时间的推移,花粉可以在低

温下分解自由基,从而减少损害,保持较高的生存

能力。

2.7　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉AsA

含量的影响

　

看出

　AsA

,大花黄牡丹花粉经过不同贮存温度和时间处

是细胞体内重要的抗氧化剂,由图5可以

理后,AsA含量变化显著不同(P<0.01)。室温、

4

AsA

℃、

-

20℃、

-

80℃贮存条件

的趋势

含量随着时间的延长

,室温、4℃、

-

20℃

,

、

呈现先升高后迅

下,大花黄牡丹

-

80℃的高峰值分别出

速

花

下

粉

降

现在第24、72、120、184天,之后除

-

80℃贮存温度

外,伴随着花粉萌发率的下降,花粉AsA含量均迅

速下降;而

-

196℃贮存温度下,花粉AsA含量先出

现震荡随后呈略为上升的趋势,365天时AsA含量

为3.25mg·g

-

1

表明此时花粉可以清除保护酶不能清除的超氧阴离

(FW),仅为原来含量的1.19倍,这

子自由基、羟自由基等自由基,进而保护花粉减少低

温伤害,保持较高的花粉萌发率。

2.8　大花黄牡丹花粉萌发率与生理指标的相关性

　

粉萌发

　由相关性分析结果

率与MDA含量呈

(表

显

2)

著负

可知

相

,

关

大花黄牡丹花

关系,与AsA

含量、SOD活性、POD活性、CAT活性呈显著正相关

0.

(P

816

<0.

5,

01

这

),

表

SOD

明大

活

花

性

黄

与

牡

花

丹

粉

花

萌

粉

发

在

率

5

相

个

关

贮

系

存温

数

度

达

图4　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉酶活性的影响

Fig.4　Effectsof

enzymatic

different

activity

storage

in

temperature

pollen

andtimeon

图5　不同贮存温度及时间对大花黄牡丹花粉AsA

含量的影响

Fig.5　Effectsofdifferent

AsAcontent

storage

inpollen

temperatureandtimeon

下,SOD活性是影响花粉萌发、花粉寿命的最主要

因子,其他主要影响因子依次是CAT活性、AsA含

量和POD活性;膜质过氧化是导致花粉凋亡的主

88

林业科学57卷　

要因素。表2表明,MDA含量与SOD呈显著负相

关,与POD、CAT、AsA呈负相关,SOD、POD、CAT、

AsA含量相互呈显著正相关,这说明大花黄牡丹花

粉中3种保护酶和AsA含量协同作用较强,花粉

SOD可以有效清除活性氧过多积累造成的花粉细

胞膜质过氧化。

表2　花粉萌发率、MDA、AsA含量以及3种保护酶活性的相关分析

①

Tab.2　Correlationbetweenpollengermination,protectiveenzymesactivity,MDA,andAsAcontent

生理指标

Physiologicalindex

MDA

POD

CAT

AsA

SOD

萌发率

Germinationrate

∗

-

0.6272

∗

MDA

-

0.4007

∗

-

0.0658

-

0.0673

-

0.1717

1

SOD

1

PODCATAsA

0.8165

0.6505

∗∗

∗

0.5888

∗

∗∗

∗

0.6223

∗

∗

0.7587

∗

0.7841

∗∗

1

　　①“∗∗”表示相关性达到极显著水平。“∗∗”indicatesthatthecorrelationappearsaverysignificantlevel.

∗

0.8257

∗

∗

0.8595

∗

∗

0.9175

∗

1

∗

0.8957

∗

1

3.1　不同培养基及不同贮存方法对花粉萌发的

影响

　　蔗糖、H

3

BO

3

、Ca

2

和GA

3

是花粉萌发率离体检

+

3　讨论

是大花黄牡丹唯一的繁殖途径是一致的,表明大花

黄牡丹具有较强的有性生殖能力。

贮存后生物材料生存力的变化是用来决定贮存

成功与否的重要指标,不同牡丹种质花期不同,自然

情况下牡丹花粉寿命仅有3~15天,因此杂交需要

贮存花粉,合适的贮存环境对于大花黄牡丹花粉延

长寿命进而通过杂交选育优良新品种具有重要意

义。研究表明,芍药属植物花粉寿命的长短受多方

面因素的制约。一是受其基因型的控制,基因型不

同,花粉寿命差异明显(李秉玲等,2010;贾文庆

等,2012;石印等,2015);二是花粉含水量是影响

花粉寿命的主要因素之一,低含水量是延长花粉寿

命的有效手段,含水量6%~13%的芍药属种质花粉

贮存寿命长(施江等,2009;李秉玲等,2010;石印

等,2015)。此外,贮存的环境极为重要,低温、干燥

和低氧环境可有效延长花粉寿命,在应用较多的室

4℃贮存芍药属种质花粉寿命为20~60天,

-

20℃

温干燥、低温干燥、冷冻干燥贮存和超低温贮存中,

贮存条件下花粉寿命为30~120天,而在

-

80℃、

(Paeoniasuffruticosa‘Shimadaijin’)、牡丹‘凤丹

白’(Paeoniaostii‘FengdanBai’)等花粉寿命均超

过1年,尤以

-

196℃液氮贮存条件下萌发率最高

(施江等,2009;李秉玲等,2010;贾文庆等,2012;

石印等,2015)。本研究也证实了这一点,室温干燥

下,大花黄牡丹花粉寿命仅有24天,而4℃、

-

20℃

环境花粉寿命在3~4个月,分析可能是较高的温度

下花粉生理代谢较强,造成大量花粉发芽力丧失;

花粉的66.23%、99.67%,这表明大花黄牡丹花粉在

这2种温度下花粉寿命均超过1年。以上结果表

明,低温特别是超低温是大花黄牡丹花粉长期贮存

的最佳环境,可能是低温降低了花粉的生理代谢,进

-

80℃、

-

196℃贮存1年的花粉萌发率分别达新鲜

-

196℃贮存环境中,矮牡丹、日本牡丹‘岛大臣’

测最常用的添加物(Feietal.,2003;Gokbayraket

al.,2017;Flores-Renteriaetal.,2018)。其中,蔗糖

不仅为花粉的萌发和花粉管的生长提供了必要的能

量,而且在一定程度上维持了外界环境的渗透压,保

证了花粉的萌发(Hiroseetal.,2014);H

3

BO

3

可以

增加花粉细胞对糖的摄取、转运和代谢,诱导Ca

2

从

外界进入细胞,建立花粉管顶端生长所需的Ca

2

梯

度;Ca

2

在花粉管极性生长和生长方向的调节中具

有重要的作用(Renetal.,2020);GA

3

对花粉萌发

和花粉管生长有重要作用,低浓度GA

3

可显著提高

杏(Prunusarmeniaca)花粉萌发率(Feietal.,2003;

Gokbayraketal.,2017;Flores-Renteriaetal.,2018)。

植物基因型不同,适宜的花粉检测培养基亦不同,芍

L

1

,硼酸浓度30~100mg·L

1

(李秉玲等,2010;律

--

+

+

+

+

药属植物花粉萌发适宜的蔗糖浓度为50~150g·

春燕等,2010;贾文庆等,2012;施江等,2013)。

本试验结果也证实了这一点,蔗糖、H

3

BO

3

、Ca

2

、

GA

3

不同组合对大花黄牡丹花粉萌发有显著影响,

萌发适宜的蔗糖浓度达120g·L

1

,高于矮牡丹

-

-

(Paeoniajishanensis)的90g·L

1

(贾文庆等,2012),

低于黄牡丹的150g·L

1

(律春燕等,2010),这表明

-

不同牡丹野生种质花粉适宜的培养基不同。花粉萌

发率与饱满率具有相关性(贾文庆等,2012;王士

泉等,2012),本试验发现,大花黄牡丹隆子县居群

开花多、花粉量大,花粉畸形率较低,平均仅5.6%,

结合萌发率(可育花粉率)90%以上来分析,二者具

有关联,饱满率高可能是大花黄牡丹新鲜花粉萌发

率较高的原因,这与成仿云等(1997)研究发现种子

　第2期贾文庆等:大花黄牡丹花粉萌发及贮存特性

89

而延缓衰老延长了花粉寿命。综上所述,

-

80℃由

于经济适用,适宜大花黄牡丹跨年杂交花粉的贮存,

而

-

196℃适合大花黄牡丹花粉的长期贮存。

3.2　花粉萌发率与MDA、AsA含量及保护酶的

关系

　

的

　

,在正常生长条件下自由基

植物体内自由基、活性氧的产生与清除是平衡

、活性氧水平较低,低

水平的自由基、活性氧不会造成损伤,且有一定的积

极作用(Kanazawaetal.,2000)。在逆境或程序性死

亡过程中,细胞内活性氧、自由基种类数量大幅度增

多,活性氧产生与清除的平衡被打破,损害生物膜及

功能,植物一般通过提高抗氧化酶活性、合成AsA

等抗氧化物质启动防御系统,减少或避免对细胞功

能的伤害(Liuetal.,2020;Renetal.,2020)。MDA

是植物细胞膜系统受害、细胞凋亡的主要标志物,测

定MDA可以推断贮存环境对花粉细胞是否造成伤

害及伤害的程度(Dongetal.,2018;Zafraetal.,

2018)

质和蛋白质的氧化损伤中起着至关重要的作用

。SOD在控制超氧阴离子的积累以防止膜脂

,但

SOD升高也增加了

化

细

酶

胞

可

中

以平

H

2

衡

O

2

的浓度,而CAT、

POD和其他抗氧H

2

O

2

的含量(Ren

et

(

al.,2020),且POD能消除酚、

剧毒活性氧成分

Liuetal.,2020)

胺、醛、苯等的毒性

,

。

例如不能被

此外,某些引起植物氧化损伤的

SOD、POD、CAT等抗

氧化酶清除的超氧阴离子和羟自由基,也是引起细

胞氧化损伤的主要因素,因此植物只能依靠非酶类

物质去除这些活性氧成分(Boseetal.,2014),AsA

是非酶抗氧化剂系统中的关键成分,是最有效的抗

氧化剂之一,AsA不仅与H

2

O

2

反应,而且与超氧阴

离子自由基、羟自由基和脂质过氧化物反应,从而维

持活性氧的平衡状态,保护细胞膜并参与其他抗氧

化剂的再生(Renetal.,2020)。

室温、4℃贮存条件下,大花黄牡丹花粉萌发

率、MDA含量、AsA含量、3种保护酶活性的变化规

律相似,随着贮存时间的延长,花粉萌发率快速降

低,MDA含量、AsA含量、3种保护酶活性基本呈升

高然后迅速降低的趋势,这可能是因为贮存初期,在

外界温度和水分的胁迫下,花粉代谢紊乱,自由基增

加,MDA增加膜质过氧化加剧,为了维持代谢平衡,

花粉细胞SOD、POD、CAT活性增加,合成AsA,协同

花粉内的脯氨酸、维生素E等清除过多的自由基、

活性氧,以维持细胞膜的稳定性。但随着贮存时间

的延长,活性氧、自由基的过度积累导致细胞损伤严

重,没有过多的保护酶、AsA来防止损伤,出现氧化

应激,细胞受到损伤,花粉逐渐衰亡,因此花粉萌发

率迅速下降。室温下,SOD活性逐渐下降,POD活

性在第24天,CAT活性、AsA含量在第40天达到高

峰值,MDA含量第72天达到峰值;而在4℃条件

下,3种保护酶、AsA含量在第24天、第72天达到

峰值,MDA含量则第184天才达到峰值,较室温推

迟112天,与SOD、CAT相比,POD、AsA含量的峰值

推迟,在

-

20℃和

-

80℃时更明显。这表明,与室温

相比,4℃下花粉活性氧积累较慢,膜系统伤害来得

较迟,MDA含量达到峰值后下降可能是细胞凋亡

后,MDA分解造成的;POD、AsA含量的峰值推迟可

能是因为贮存时花粉细胞不仅产生SOD、CAT可以

清除的活性氧,还可能产生其他有毒物质,如超氧阴

离子自由基、羟自由基、胺或酚类物质(Fecht-

Christoffers

牡丹

-

花

20

粉

℃

et

萌

贮存下

al.,2006;

发率下

,

降

贮存初期

Liuet

缓慢,SOD、

(

al.

第

,

0

2020)

POD

~40

。

活

天

性

)大花黄

及AsA

含量持续增加,而CAT活性则在下降后缓慢上升,

MDA

协调3

含量则缓慢上升

种类型的保护酶

,可能是在这一时期花粉通过

、AsA含量来维持自由基的

产生和消除之间的平衡,从而维持花粉发芽力。随

着贮存时间的延长,花粉萌发率明显下降,MDA含

量持续上升,SOD活性在第72天出现高峰后迅速下

降,而POD、CAT活性及AsA含量则在120天达到

高峰随后下降,这表明第72天到120天,花粉中活

性氧种类及其他有毒物质如酚类或胺类物质在增

加,花粉通过不断增加POD、CAT活性及AsA含量

消除这些有毒物质,从而减缓花粉活性的丧失

天后

(Fecht-Christoffers

,花粉萌发率仅

et

为

al.

贮

,2006)

存前萌

。

发

-

20

率的

℃贮存第

12.9%,

365

分

析可能是因为在大多数花粉中,自由基、活性氧积累

过多,膜质过氧化严重,花粉细胞损伤加剧,导致花

粉无法萌发,只有一小部分花粉能够产生保护酶、

AsA

(2011)

来

(

的研究表明

维持活性

,

(

在

贾

-

文

20

庆

℃

等

贮存

,2015

358天后

)。谭

,

健晖

(42.

Pinus

因素的不同

20%)

massoniana

和较强的抗氧化能力

)的花粉仍然保

,不同植物花粉的萌发和贮存特性不同

。

持

这表明由于遗

较高的萌

马尾松

发率

传

-

。

花粉通过增加

80℃贮存的早期

SOD活性

(

、AsA

第0~

含量来维持内部代谢

72天),大花黄牡丹

平衡,花粉萌发率缓慢下降;贮存第72~184天,

MDA

在下降后又上升

含量持续增加

,POD

,SOD

活性

活

、AsA

性不断

含量则持续上升

上升,CAT活性

,

分别在第120、184天达到高峰,这表明此阶段活性

氧持续增加,需要协调3种保护酶及AsA含量清除

有毒物质维持花粉活性。贮存后期(184~365天),

90

林业科学57卷　

花粉中的活性氧逐渐积累,MDA含量逐渐增加显示

膜质过氧化逐渐加重,导致花粉萌发率逐渐下降,为

了消除细胞中过多的活性氧,细胞SOD活性升高,

在此期间,细胞内的其他有毒物质可能逐渐减少,所

以细胞只需要增加CAT活性来清除H

POD

加。因此

活性

,

、AsA

在花粉贮存过程中

含量缓慢下降

,

,

影响花粉萌发率的不

而CAT活

2

O

性

2

,

逐

因

渐

此

增

,

仅是活性氧,还有其他有毒物质,具体还需要进一步

的研究。综合来看,大花黄牡丹

-

80℃贮存期间,花

粉3种保护酶、AsA含量、MDA含量总体变化幅度

较

-

20℃、4℃、室温下小,这可能是大花黄牡丹花

粉贮存1年后萌发率仍保持在较高水平的原因。

许多植物花粉在超低温贮存时出现“冷刺激”

现象,日本牡丹、矮牡丹等芍药属植物花粉也有类似

发现(李秉玲等,2010;贾文庆等,2012),其发生原

因可能与贮存后花粉细胞内Ca

2

+

增加、存在差异蛋

白有关(李秉玲等,2010)。本研究发现,

-

196℃下

大花黄牡丹花粉贮存前期(第0~40天),花粉并非

处于生理停滞状态,同

-

80℃一样,贮存第40天,花

粉萌发率升高,出现“冷刺激”现象,较贮存前新鲜

花粉分别提高1%和1.5%,伴随着花粉萌发率的提

高,花粉MDA含量降低,而SOD、POD、CAT、AsA含

量升高,这表明超低温下大花黄牡丹花粉细胞自由

基、活性氧较少,膜质过氧化程度低,花粉细胞健康

程度提高,推测这可能是大花黄牡丹花粉萌发率

“

究

冷刺激

。贮存中后期

”现象发生的生理原因

(第40~365天

,

)

具体有待进一步研

,MDA含量处于较

低的水平,一直保持稳定,而SOD、CAT、POD及AsA

同样

-

保持稳定,贮存过程中无显著差异,这表明

CAT、POD

196℃下贮存1年的过程中,花粉细胞内SOD、

性氧和其他有毒物质

及AsA协同

,处于代谢平衡状态

作用,有效清除了

,

多

未造成严

余的活

重的膜质过氧化,这是大花黄牡丹花粉贮存后萌发

率仍较高的原因。

前人研究表明,马尾松、银杏(Ginkgobiloba)、

大花红山茶(Camelliamagniflora)、芍药(Paeonia

lactiflora)等植物花粉的保护酶活性、MDA和AsA

含量与萌发率具有相关性(谭健晖,2011;刘艳萍

等,2013;贾文庆等,2015;石印等,2015)。花粉

萌发率与5个生理指标的相关分析表明,大花黄牡

丹花粉在贮存过程中,SOD活性是影响花粉萌发、

花粉寿命的最主要因子,其次的因子依次为CAT活

性、AsA含量和POD活性;膜质过氧化是导致花粉

凋亡的主要因素。这些结果表明SOD在大花黄牡

丹花粉贮存过程可以有效清除活性氧,防止或减轻

膜质过氧化程度过高引起的细胞凋亡。本试验结果

表明,室温下随着贮存时间的延长,大花黄牡丹花粉

POD

迅速降低

活性首先快速升高后降低

,SOD活性逐渐降低,CAT

,随着花粉萌发率的

则缓慢升高后

降低,之后随着贮存时间的延长3种保护酶活性均

迅速降低,说明POD在室温下较为敏感。4℃下,

SOD

抗氧化能力

和CAT

有

在第

限,

24

胁迫

天同时出现峰值

的加重POD活

,

性

但

升

2

高

种

,AsA

酶的

含量增加,在第72天达到峰值,之后迅速降低,与此

同时,花粉萌发率迅速下降,说明花粉SOD和CAT

在4℃下较为敏感。

-

20℃、

-

80℃下,花粉SOD

活性则首先快速升高,说明SOD较为敏感。综上所

述,POD在大花黄牡丹花粉室温贮存时为敏感的保

护酶,SOD在

-

20℃和

-

80℃贮存时为敏感的保护

酶,而SOD和CAT在4℃贮存时为敏感的保护酶,

这与本试验的相关分析一致。

4　

　

结论

萌发率与饱满率具有相关性

　大花黄牡丹自然环境下花粉畸形率低

;适宜大花黄牡丹花粉

,花粉的

萌发率检测的培养基为120g·L

-

1

蔗糖

+

45mg·L

-

1

硼酸

+

55mg·L

-

1

度直接影响大花黄牡丹的花粉萌发率

GA

3

+

30mg·L

-

1

CaCl

2

;

,室温适合大

花粉贮存温

花黄牡丹花粉1~24天的短期贮存,4℃、

-

20℃适

合杂交时间间隔在80~120天大花黄牡丹花粉的中

期贮存,

-

80℃适合花粉的跨年贮存,而

-

196℃适

合大花黄牡丹种质花粉的长期贮存;相关性分析结

果显示,SOD活性是影响贮存期间大花黄牡丹花粉

萌发、花粉寿命的最主要因子,其他因子依次为

CAT

致花粉死亡的主要因素

活性、AsA含量和POD

。花粉细胞内代谢处于动态

活性,膜质过氧化是导

平衡状态、细胞膜系统稳定是

-

196℃下大花黄牡丹

花粉保持高萌发率的生理响应

-

;室温、4℃、

-

20℃、

著升高后迅速降低

80℃贮存期间,花粉保护酶活性

,清除活性氧、自由基能力下降

、抗坏血酸含量显

,

活性氧、自由基积累过多,膜质过氧化程度加剧,细

胞损伤严重是贮存期间花粉萌发率下降的主要

原因。

参考文献

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Chinese

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Society

on

Y

pollen

Z,Wang

)

ofAgricultural

longevity

YL,

of

Engineering,

Paeonia

etal.2020.

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Effectsofstorage

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-

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QB,ZhouZQ,Zhao

sequences

thewildspeciesof

X,

Paeonia

etal.

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Moutan

Interspecific

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627

-

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(Liu

conditions

YP,Zhu

on

YL,

germination

MaYT,

rate

etal.

and

2013.

protective

Effects

enzymes

ofdifferent

activity

storage

lofNortheastForestry

of

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Y,Wang

lutea

Y,

’

Zhu

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Y,JiaM

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W,

peony

etal

pollen

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during

Research

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75

J,

-

80.

components

WangX

on

Y,

pollen

Zhang

germination

SL,et

and

al.

tube

2013.

growth

Effect

of

of

tree

medium

(Paeoniasuffruticosa).JournalofHenanUniversityofScience

peony

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(Shi

Paeonia

J,XinL,

suffruticosa

ShiGA,

under

etal

three

.2009.

store

Pollen

temperature.

storage

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characteristic

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germination

sof

ia

rate

Silvae

andprotective

storagetemperatureandstoragetimeon

Sinicae,

enzymes

47(9):

activity

28

-

32.

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X

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L,Liao

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denudata

LiuQ,et

pollen

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stressand

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/orapoptosis

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of

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318.

(Yang

Paeonia

X,Lu

ludlowii

J.2010.

.Jiangsu

Nichecharacteristics

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ofdominant

38(1)

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:314

-

318.

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杨小林

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1247.

(Yang

endangered

XL,WangQJ,LanXZ,etal.

曾秀丽

Sinica,

,代安国

27(3)

plant

,李

:1242

population

-

　青,

1247.

等.2009.

[

of

in

Paeonia

2007.

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ludlowii

Numeric

部分牡丹花粉粒超微结构的研

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(Zeng

morphology

XL,Dai

and

AG,

ultra

LiQ,

micro

etal

structure

.2009.

of

A

several

preliminary

treepeonies.

studyon

Journal

pollen

ofSichuanAgriculturalUniversity,27(4):

Akhond

Chinese]

between

MAY,

)

466

-

470.[in

Abelmoschus

MollaMA,IslamMO,ompatibility

114(3):175

-

180.

ica,

Bose

halophytes

J,Rodrigo-Moreno

inthecontext

A,Shabala

of

eostasisin

Dong

ExperimentalBotany,65(5):1241

salinity

-

1257.

lof

pollen

BD,Zheng

sterility,

X,

grain

LiuH

yield,

P,et

abscisic

al.2018.

acid

Effects

andprotective

ofdroughtstresson

Fecht-Christoffers

twowinterwheat

hydrogen

MM,

cultivars.

FuhrsH,

Frontiers

Braun

in

H

Plant

P,et

Science,

al.2006.

8:

enzymes

The

1008.

in

peroxidases

peroxide-producing

intheleafapoplast

andhydrogenperoxide-consuming

roleof

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longevity

E.2003.

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Estimationofpollenviability,sheddingpattern,

:2177

Creeping

-

2181.

Flores-Rentería

temperature

L,

adaptation

Science,9:

to

at

Whipple

536.

heat

lower

stress

elevation

AV,

during

sites

Benally

pollen

fails

G

germination.

to

J,

promote

etal.

Frontiers

acclimation

inPlant

or

Gokbayrak

effects

Z,

on

nosteroidsandgibberellicacid:

Hirose

(3)

e,51

mutants

T,

:

Hashida

303

-

307.

ofasucrose

Y,Aoki

phosphate

N,etal.

synthase

is

genein

ofgene-disruption

shows

rice,OsSPS1,

Kanazawa

Plant

S,

Science,

theimportance

SanoS,

225:

Koshiba

102

of

-

sucrose

106.

synthesisinpollengermination.

enzymesin

T,sin

comparisonwith

cucumber

thoseduring

cotyledons

dark-induced

during

senescences.

natural

antioxidative

senescence:

Plantarum,109(2):211

-

216.

Physiologia

LiJ,

activity

WangZH.

ludlowii

of

.Emirates

the

2019.

flowers

Nutrients,

Journal

andseed

fatty

ofFood

oils

acid

and

inwild

composition

Agriculture,

populations

andantioxidant

31(

of

3)

Paeonia

:206

-

LiuX

213.

storage

S,Xiao

characteristics

YF,WangY,

of

et

Keteleeria

al.2020.

fortunei

Thein

var.

vitrogerminationand

RenR,

provide

antioxidant

LiZ

a

D,

reference

Zhang

for

LL,

cross

et

lasma,

cyclolepis

4:1

-

10.

pollen

suffruticosa

systems

impact

al.

Cell

the

2020.

Tissue

viability

Enzymaticandnonenzymatic

andOrgan

ofcryopreserved

Culture,2:

Paeonia

1

-

14.

Shekari

sucrose

A,Nazeri

pollen.

andtemperature

V,Shokrpour

onthe

M.

germination

nce

of

ofboricacid,

363

-

366.

InternationalJournalofFarmingandAllied

Leonurus

Sciences,

cardiaca

5(5)

L.

:

Sorkheh

temperature

K,AzimkhaniR,MehriN,et

Zafra

germinationand

and

tube

genotype

length.

on

Scientia

almond

al.

(

2018.

Prunus

Interactive

dulcisL.

effects

)pollen

of

dismutase

A,CastroAJ,fication

Horticulturae,

ofnovel

227:

superoxide

162

-

168.

PlantBiology,

isoenzymes

18:114.

intheolive(OleaeuropaeaL.)

(责任编辑　徐　红)