2023年12月7日发(作者：z138次列车)

产品详细说明

2×Master PCR Mix

2×Master PCR Mix中含有2×Taq DNA Polymerase，2×PCR Buffer，2×dNTP及PCR反应的优化剂和稳定剂，只需加入适量引物、模板和水即可进行PCR扩增。大大简化了PCR操作，使操作更加快捷，提高了效率；也减少了PCR操作过程中可能导致的污染，使PCR的重复性更好。且含有电泳时所必需的试剂，可直接上样电泳。

2×Master PCR Mix可以进行各种常规的PCR扩增，特别适合用于定量和半定量的PCR扩增。

二、试剂盒组份

组份

2×Master PCR Mix

Cat ：BM321

0.5mL

Cat ：BM322

1.0mL

Cat ：BM323

1.0mL×6

2×Master PCR Mix中的组份包括：

2×PCR buffer

0.4mM dNTPs

3 mM Mg

0.1u/μL Taq DNA Polymerase

溴酚蓝和比重增加物

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

无菌双蒸水，模板，PCR管，可调移液器，PCR仪。

四、保存条件：

-20℃保存，一年有效。

五、注意事项：

1、

由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍，在使用Taq酶时请注意避免微量待扩增DNA的污染，并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。

2、

Taq DNA polymerase在PCR过程中每循环的出错几率约为2.2×10，对于大于1kb的DNA片断的克隆推荐使用出错几率更低的DNA聚合酶，例如Pfu DNA polymerase。对于普通的PCR或RT-PCR定性检测或定量检测，Taq DNA polymerase是最佳选择。

3、

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

六、操作规程

1、

使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s。

2、

取灭过菌的0.2ml PCR管，参考如下表格设置反转录反应（50 μL反应体系）：

双蒸水

2×Master PCR Mix

引物I(10μM)

引物II(10μM)

模板DNA

总体积

23 -n μL

25 μL

1 μL

1 μL

n μL

50 μL

-52＋ 注：对于不同类型的模板在50µl反应体积中推荐用量如下：

哺乳动物基因组DNA：0.1-1µg；大肠杆菌基因组DNA：10-100ng；质粒DNA：0.1-10ng。

过多的模板DNA容易导致非特异性的PCR产物

3、

轻轻混匀(可以用Vortex在最低速度轻轻混匀或用移液器吹打混匀)，随后2000rpm离心20s沉淀液体。

4、

如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖，则在管内滴入一滴矿物油。

5、

各设置好的PCR反应管置于PCR仪上，开始PCR反应。

a、

PCR扩增条件参考：

Step1(起始变性)： 94℃ 3min

Step2(变性)： 94℃ 30sec

Step3(退火)： 45～65℃ 30sec

Step4(延伸)： 72℃ 1min

Step5(循环)： Go To Step2 for 25～35 cycles

Step6(最终延伸)： 72℃ 10min

StepP6(临时保存)： 4℃ forever

b、

PCR反应的设置需根据模板、引物、PCR产物的长度和GC含量等条件的不同设定不同的PCR反应条件包括温度、时间、循环数及镁离子的浓度等。

c、

Step4(延伸)的时间设置需根据PCR产物的长度进行设置，通常每kb产物的延伸时间为1分钟。例如PCR产物的长度为1kb，则延伸时间可以设置为1分钟，PCR产物的长度为2kb，则延伸时间可以设置为2分钟，以此类推。

d、

对于初次进行的PCR，为尽量确保可以扩增出预期的PCR产物，可以把循环数设置为35。对于需进行半定量或定量的PCR反应循环数一定要进行适当优化，使PCR反应没有达到平台期。

6、

反应结束后，取反应液10μL进行琼脂糖凝胶电泳，确认PCR反应产物。如果此PCR产物需用于以后实验，应将PCR产物冷冻保存。

七、常见问题分析及解决方案

常见问题 可能原因

引物设计不合适，靶假阳性

序列太短或引物太短

靶序列或扩增产物的交叉污染

重新设计引物

操作时应小心轻柔，所有试剂或器材均应高压消毒，所用离心管及进样枪头等均应一次性使用。

1、

请选择适当的引物设计软件进行引物设计，注意引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。

2、

在加入酶切位点等的引物中，一定要注意加入酶切位无扩增条带、

PCR产物非常少

或有非特异性条带

点等后整条引物的GC含量、二级结构、二聚体、退火温度、长度、特异性等方面的问题。

建议解决方案

引物设计不佳

3、

引物的浓度除了测定OD值，还要做琼脂糖凝胶电泳，两个引物的条带的亮度要相当，假如相差太大，在稀释引物时要平衡其浓度。

4、

引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效；

5、

在原有引物效果不佳的情况并且阳性对照引物可以正常工作的情况下，可以考虑更换引物。 GC含量较高的情况下PCR会变得相对比较困难，此时可以待扩增片断

GC含量偏高

使用适合扩增高GC含量DNA片断的GC-rich buffer，并相应地根据GC-rich buffer的要求或说明调整PCR反应参数的设置。

延伸时间不足。

待扩增片断GC含量较高或长度较长，变性不够充分。

循环数不足

模板含量太低

PCR反应设置时在室温进行容易导致非特异性条件

可按照每1kb片断延伸1分钟进行设置，对于较难扩增的片断可以设置为每1kb片断延伸1.5-2分钟。

可以调节起始变性条件至95℃ 1min甚至95℃ 2-4min。

适当延长PCR的循环数。通常循环数最高不必超过40，常用的循环数范围为25-35。

适当加大模板量，或采用巢式PCR(nested PCR)或二次PCR。

在冰浴上设置PCR反应。

模板中含有抑制PCR反应的物质

形成引物二聚体

镁离子浓度太高

可以用适当的DNA纯化方法例如柱纯化等纯化模板DNA。

可以采用Touch down等方法进行退火，通常采用从65℃逐步缓慢降温到55或50℃的方法，使退火更加充分。

对于每一个模板和引物组合优化镁离子浓度。

退火温度不佳，

需要优化

PCR反应中引物过多

有弥散条带带

循环数过多

退火温度过低

如果有温度梯度PCR仪，则可以设置退火的温度梯度，摸索退火的最佳温度。

减少引物的用量。

优化PCR反应条件，减少PCR的循环次数。

提高退火温度，防止非特异性的起始及延伸。

PCR TaqMix|PCR Mix

发布人：浩然生物 浏览 642次【字号

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中

小】 发布时间：2010年10月04日

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PCR Mix（40厂家 规格 单价 详细

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P2011

P2012

产品组分

P2011

次）

DongSheng

DongSheng

1 ml

1 ml×5

120

500

PCR Mix（200次）

2×PCR Mix 1ml 1支

超纯水 1ml 1支

P2012

2×PCR Mix 1ml 1支×5

超纯水 1ml 1支×5

注： 本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中

包含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存2年。

请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。

产品说明

PCR Mix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增

体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）同时，由于体系内含有增强剂，能够显著增强PCR扩增的

灵敏度。扩增产物具有3’-dA突出端。

Taq DNA聚合酶是嗜热性细菌Thermus aquaticus来源的热稳定重组型Taq DNA聚合酶，分子量为94 KD。扩增片段的长度可达5 kb（简单模板）。延伸速度为

0.9-1.2 kb/ min（70-75 ℃）。该酶具有5’→3’聚合酶活性，无3’→5’外切酶活性。

产品特点

使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。

快速、高效：减少加样步骤，节约时间。

可重复：降低污染和加样错误风险

产品用途 高通量PCR检测。

高重复性PCR检测。

制备TA克隆用的PCR产物。

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置

一周，扩增活性无明显改变。

2×PCR TaqMix的组分

100 mM KCl

20 mM Tris-Cl

3 mM MgCl2

400 mM dNTP混合物

0.1 U/μlTaq DNA聚合酶

溴酚蓝等

产品 » 所有 » DNA 电泳 » GeneRuler™ DNA Ladders » GeneRuler™ DNA Ladder Mix, 100-10,000 bp GeneRuler™ DNA Ladder Mix, 100-10,000 bp

配套提供:

MSDS

目录号#

规格、浓度

分析报告

6X DNA Loading Dye

g (0.5 µg/µl)

2 x 1.00 ml

SM0331

250 (5x50) µ

g (0.5 µg/µl) 10 x 1.00 ml

SM0332

250 (25x50) µ

SM0337

50 µ

g (0.5 µg/µl)

产品信息

SM0331

选择

SM0332选择2 x 1.00 ml

选择操作方法和使用推荐

示踪染料的大致位置, bp*

琼脂糖凝胶, %

有效分离的分子量范围,

bp

溴酚蓝

二甲苯青FF

TAE 缓冲液

16700

11600

8500

6500

5140

TBE 缓冲TAE 缓冲TBE 缓冲液

液

液

750

540

410

320

260

1150

850

660

530

440

13000

8820

6400

4830

3770

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

2000-50000

1000-20000

800-12000

800-10000

600-10000 1.0

1.2

1.5

2.0

3.0

4.0

5.0

400-8000

300-7000

200-3000

100-2000

25-1000

10-500

10-300

220

160

110

65

30

18

12

370

275

190

120

60

40

27

3030

2070

1300

710

300

170

105

4160

2890

1840

1040

460

260

165

示踪染料的大致位置*

聚丙烯酰胺凝胶, % (w/v)

有效分离的分子量范围*

溴酚蓝

变性胶

4.0

5.0

6.0

8.0

10.0

15.0

20.0

30.0

非变性胶

3.5

5.0

8.0

12.0

15.0

20.0

100-1000 bp

80-500 bp

60-400 bp

50-200 bp

25-150 bp

5-100 bp

100 bp

65 bp

45 bp

20 bp

15 bp

12 bp

460 bp

260 bp

160 bp

70 bp

60 bp

45 bp

100-500 b

70-400 b

40-300 b

30-200 b

20-100 b

10-50 b

5-30 b

1-10 b

50 b

35 b

26 b

19 b

12 b

10 b

8 b

6 b

230 b

130 b

105 b

75 b

55 b

0 b

28 b

20 b

二甲苯青FF DNA分子大小

<1 kb

1-5 kb

> 5 kb

长达10 kb, 高通量电泳，Express DNA ladders

电压

5-10 V/cm

4-10 V/cm

1-3 V/cm

缓冲液

TBE

TAE 或 TBE

TAE

高达 23 V/cm

TAE

1.

普通包装(TE缓冲液保存)DNA ladders/markers

技术 参数

GeneRuler™ DNA ladders Lambda DNA markers Phage & Plasmid DNA markers Markers for Genomic DNA Analysis

50 µg (100 µl) 可用于：

50 µg (100 µl) 可用于：100 次，琼脂提供量 / 使用次数

50 µg (100 µl) 可用于：





100 次，琼脂糖凝胶

糖凝胶





6 µg (30 µl) 可用于：120次，琼脂糖凝胶

100次，琼脂糖凝胶

50次，非变性PAGE凝胶

50次，非变性PAGE凝胶

1 mm宽凝胶泳道的使用0.1 μg (0.2 μl)，琼脂糖凝胶

0.1 μg (0.2 μl)，琼脂糖凝胶

量

0.2 μg (0.4 μl)，PAGE凝胶

0.1 μg (0.2 μl)，琼脂糖凝胶

6 ng

0.2 μg (0.4 μl)，PAGE凝胶

1 μl (0.2 μg) DNA marker 与39 μl无核酸酶稀释 不需要 不需要 不需要

水混合

使用前：

加热 无需加热

65°C加热5分钟、冰浴3分钟

无需加热

使用前：

65°C加热5分钟、冰浴3分钟

I. 琼脂糖凝胶上样：

DNA ladder/marker

上样染料

1 µl (0.5 µg)

2 µl

1 µl (0.5 µg)

2 µl

9 µl

1 µl (0.5 µg)

10 µl (50 ng) 稀释的marker

2 µl

1 µl

9 µl

水，无核酸酶 (#R0581)

9 µl

轻轻混匀后凝胶上样

II. 聚丙烯酰胺凝胶上样：

DNA ladder/marker

上样染料

2 µl (1 µg)

0.5 µl

不推荐PAGE凝胶应用

2 µl (1 µg)

0.5 µl

0.5 µl

不推荐PAGE凝胶应用

水，无核酸酶 (#R0581)

0.5 µl

轻轻混匀后凝胶上样

DNA ladders/markers, ready-to-use

技术 规格

GeneRuler™ &

MassRuler™

O'GeneRuler™

DNA ladders

DNA ladders

DNA ladders DNA ladders Express DNA ladders

FastRuler™ O'RangeRuler™ ZipRuler™

Lambda DNA markers Phage & Plasmid DNA markers 500 µl for

提供量/使用次数

100 次

2x500 µl for

50-200 次

2x500 µl for

500 µl, 100 次

50-333 次

2x500 µl,

100-200 次

500 µl,

100 次

500 µl,

100 次

使用前：

加热 无需加热

65°C加热5分钟、冰浴3分钟

无需加热

轻轻混匀后凝胶上样

1 mm宽度凝胶泳道的上样体积

1-2 µl

可变的 可变的

1-2 µl 1-2 µl 1-2 µl 1-2 µl

线性DNA

10X反应缓冲液B(T4 Polynucleotide Kinase)

[gamma-32P 或 gamma-33P]-ATP

24% (w/v) PEG 6000 溶液

T4 Polynucleotide Kinase

水，无核酸酶 (#R0581)

总体积

1-20 pmol 5'-末端

2 µl

40 pmol

4 µl

1 µl (10 u)

至 20 µl/td>

20 µl

1.

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查看大图

特点

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适合DNA大小鉴定和粗略定量。

条带窄。

明亮参考条带(红色标记)。

配套提供样本DNA上样染料。

说明

GeneRuler™ DNA Ladder Mix ladders 推荐用于宽分子量范围双链DNA片段的大小鉴定和粗略定量(琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶)。这些Ladders是层析纯化的个体DNA片段的混合物。

GeneRuler™ DNA Ladder Mix ladders可被T4 Polynucleotide Kinase (#EK0031)标记 , 见操作方法。

Ladders 产品中配套提供6X DNA Loading Dye可用于样本DNA电泳前处理。

保存缓冲液(TE缓冲液)

10 mM Tris-HCl (pH 7.6)和1 mM EDTA。

6X DNA Loading Dye

10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 0.03% 溴酚蓝, 0.03%二甲苯青FF, 60%甘油和60 mM EDTA。

质量控制

凝胶电泳测试产品质量。Ladder中各条带DNA的浓度经分光光度计检测。相关测试结果表明无核酸酶污染。

保存

-20°C保存。

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保存于运输说明：

-20℃保存1年。 请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。

详细信息：

PlusMix

货号

P2031

P2032

规格

1 ml（40次，50μl体系/次）

1 ml×5（200次，50μl体系/次）

价格

200

800

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产品组分

P2031

2×PCR PlusMix 1 ml 1支

超纯水 1ml 1支

P2032

2×PCR PlusMix 1ml 1支×5

超纯水 1ml 1支×5

注：本产品分含体系中包含溴酚蓝、不含溴酚蓝两类。体系中包含溴酚蓝的产品，PCR扩增产物可直接电泳检测。这两类产品的扩增性能无差异。如没特别说明提供体系中包 

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含溴酚蓝的包装。

保存条件

-20℃保存1年。

请勿保存于-70℃，防止反复冻融导致酶活降低。

产品说明

PlusMix是2×浓缩的PCR扩增预混和溶液，含有PlusTaq DNA聚合酶、dNTP混合物、缓冲液等PCR扩增必需组分（模板与引物除外）。使用时，仅需在扩增

体系中加入模板和引物即可进行PCR，大大简化操作过程，缩短操作时间，降低污染（加样次数减少）。同时，由于体系内含有优化剂与增强剂，能够显著增

强PCR扩增的灵敏度。扩增产物具有两种末端：平末端与3’-dA。

PlusTaq DNA聚合酶是Taq DNA聚合酶与Pfu DNA聚合酶的独特比例混合物。其保真性是Taq DNA聚合酶的4倍，扩增片段的长度可达20 kb（简单模板）。在扩增复杂模板（如

GC-rich或重复序列）时，Taq Plus DNA聚合酶的扩增效率高于Taq DNA聚合酶，可用于复杂模板的PCR扩增。

产品特点

使用方便：仅需加入模板和引物即可进行PCR扩增。

快速、高效：减少加样步骤，节约时间。

可重复：降低污染和加样错误风险。

产品用途

杂模板PCR扩增

高通量复杂模板PCR扩增

高重复性复杂模板PCR扩增

制备TA克隆用PCR产物

活性定义

一个活性单位（U）指用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，在72℃、30 min内，摄入10 nmol全核苷酸所需的酶量。

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；PCR方法检测无宿主残余DNA，能有效扩增人基因组中的单拷贝基因；室温放置一周，

扩增活性无明显改变。

2×PCR PlusMix的组分

100 mM KCl

20 mM Tris-Cl

3 mM MgCl2

400 mM dNTP混合物

0.1 U/μl PlusTaq DNA聚合酶

溴酚蓝等

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应用举例

注：以下反应举例为50 μl标准PCR体系，仅供参考。实际PCR条件应根据模板、引物结构、目的片段大小加以优化，确定最佳反应条件。

以λDNA为模板，扩增1kb片段。

λ DNA（2.5 ng/μl） 1μl

Primer 1（10μM ） 2μl

Primer 2（10μM） 2μl

2×PCR PlusMix 25μl

dd H2O 补足至50μl

反应条件

95℃ 3 min

95℃ 30 sec

55~68℃ 30 sec 30 Cycles

72℃ 1 min

72℃ 5 min

备注

1 建议在冰上配置PCR 反应液后，再放入PCR仪中进行扩增。这有利于提高扩增的特异性，减少非特异性扩增，得到良好的PCR结果。

2 PCR PlusMix的扩增产物有两种末端：平末端和3’-dA突出末端。要提高克隆效率，建议PCR产物纯化后，加A再进行TA克隆。

3 模板DNA推荐用量（50 μl PCR反应体系）

人类基因组DNA 0.1 – 1 μg

λDNA 0.5 – 5 ng

质粒DNA 0.1 – 10 ng

大肠杆菌DNA 10 – 100 ng