2024年4月14日发(作者：)

１３１Ｔ＂ｈ．ＨＥＲＥＤＩＴＡＳ．（Ｂｅｉｊｉｎｇ）　１０　（６）：　１８－２２　１９８８

小鼠脾脏与骨髓细胞在微核试验和染色体

畸变分析中的应用

殷学军刘德样黄世友，）王河川

（兰州军区乌鲁木齐总医院遗传室）

由于小鼠骨髓多染红细胞微核（ＰＣＥＭＮ）

不同剂量组分别行背部皮下注射，对照组注射

试验法具有简便快速等优点，在遗传毒理学研

生理盐水。观察４８小时内小鼠反应和体重情

究中得到了广泛应用，但与中期细胞染色体畸况。待注射“小时，每１０克体重腹腔注射０．１

变（ＣＡ）分析法相比，能检测的染色体畸变类

ｍｌ秋水仙素（１００ａｇ／ｍｌ），　４小时后处死小鼠，

型较少〔１１。虽然小鼠骨髓染色体畸变分析可弥

先取出脾脏剪成３块，放在培皿中的输血滤网

补其不足，但认为难以得到足够的分裂相Ｃ２）。自上，以注射器蕊轻挤研使细胞通过滤网而悬于

Ｎｏｗｅｌｌ发现植物血凝素（ＰＨＡ）在体外有刺３　ｍｌ无菌小牛血清内。剥离小鼠后肢两根股骨，

激细胞分裂的能力［１９Ｉ；　Ｍｏｏｒｈｅａｄ等建立人外去股骨头，用无菌小牛血清冲出骨髓细胞于离

周白细胞培养以来〔３３，　ＰＨＡ已广泛用于血细胞

心管中。脾ＪＡ、骨髓细胞悬液先各涂两张玻片，

转化试验。作者受吴氏启发‘３１，应用ＰＨＡ直接

晾千，甲醇固定２５分钟晾千，备ＰＣＥＭＮ观

注射于小鼠背部皮下，刺激脾胜、骨髓淋巴细胞

察。其余细胞悬液１０００ｒｐｍ离心，分钟，去上

转化，有效地提高了它们的分裂指数，观察到清液后加ｌ　Ｏｍｌ生理盐水再洗一次。加０．０７５Ｍ

ＰＨＡ对脾脏、骨髓ＰＣＥＭＮ和ＣＡ无任何影ＫＣｌ　１０ｍｌ充分混匀３７℃水浴中低渗２５分钟，

响。经丝裂霉素Ｃ　（ＭＭＣ）验证表明，此法可甲醇：冰醋酸（３：１）固定４次，每次１５分钟，气

同时完成细胞染色体畸变率和微核率两项指标

千法制片。脾脏、骨髓ＰＣＥＭＮ标本均以叮咤

的观察，不仅有利于活体样本中微核（ＭＮ）和

橙（ＡＯ）染色〔”，染色体标本均为常规Ｇｉｅｍｓａ

ＣＡ的相关性研究，而且脾脏和骨髓可以相互

染色。每只小鼠脾脏和骨髓的染色体标本分别

替代，为评价被检物的毒理效应提供了方便。

随机计数１００００个细胞中出现的分裂相，以分

裂指数均数（务）表示。染色体畸变类型的判断

材料和方法

以人类细胞遗传学命名的国际体制（１９７８）非显

（一）动物及试剂

带标本规定的定义为标准，以染色体细胞畸变

动物选用津白Ｉ小鼠，体重１９－２２克。

率（多）表示。微核观察于荧光显微镜下进行，

ＰＨＡ，广州制药厂生产（针剂）ｏ　ＭＭＣ（日本）

以微核细胞率（／Ｖ）表示。

药用粉剂。

２．　ＭＭＣ诱发脾脏、骨髓ＰＣＥＭＮ和ＣＡ

（二）实验方法

的观察根据前述实验结果（表１），小鼠皮

１．　ＰＨＡ对小鼠脾脏、骨髓淋巴细胞有丝

分裂相的影响动物分７组，每组１０只，雌

Ｙｓｎ　Ｘｕｅｆｕｎ　ｅｌ　ａｌ．：　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＭＮ　ａｎｄ　ＣＡ　ｉｎ

雄各半，逐一称重。ＰＨＡ以生理盐水稀释，按

Ｍｏｕｓｅ　Ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　Ｂｏｎｅ　Ｍａｒｒｏｗ　Ｃｅｌｌｓ

１）阿克苏市东城医院。

５０，　１００，　２００，　３，００，　４００，　５００ｍｇ／ｋｇ体重６个

本文于１９８７年４月２日收至‘

１８

下注射ＰＨＡ量取２００ｍｇ／ｋｇ体重，ＭＭＣ给

结果与讨论

药量按标定的ＬＤｓｏ（ｉ．ｖ　－　５ｍｇ／ｋｇ体重）的

１／２，　１／４，１／８，１／１６取量，即２．５，　１．２５，　０．６２５，

（一）不同剂盆ＰＨＡ刺激小鼠脾脏、骨

０．３１２５ｍｇ／ｋｇ体重。考虑到ＭＭＣ诱发ＤＮＡ

髓细胞的分裂指数

损伤通常是在Ｓ期的特点〔７３，按Ｈｅｄｄｌｅ推荐的

如表１所示，ＰＨＡ各剂量组脾脏和骨髓

一次染毒方案Ｌ，待ＰＨＡ注射４６小时将生理

细胞分裂指数均高于相应对照组，差异非常显

盐水稀释的上述不同剂量的ＭＭＣ注人小鼠腹

著（Ｐ＜０．００１），表明ＰＨＡ能有效地提高脾

脏和骨髓细胞分裂指数，同ＰＨＡ肌注能使小

鼠体内淋巴细胞转化率增高的结论相吻合〔３１Ｃ

腔，２０小时后注射秋水仙素（同上），４小时后

按方法１制备标本和观察。

表１不同剂皿ＰＨＡ对小鼠脾脏、骨髓细胞分裂指数的影响

脾脏

尸值（同对照

组比较）

分裂相数

５４９

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

４０９３

骨髓

Ｐ值（同对

照组比较）

ＨＡ（－ｇ／ｋｇ

动物（只）分析细胞数

体重）

０

分裂相数

２００

６３０

分裂指数

（％）

０．２

０．６

分裂指数

（％）

０．６

４．１

１０

１０

１０００００

１０００００

１０００００

１０００００

５０

１００

２００

３０口

４００

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

＜０．００１

１０

１０

１０

１０

７５８

１８１４

０．８

１．８

５２５７

５６１２

３２９５

１４９０

８４７

５．３

５．６

３．３

１．５

０．９

１０００００

１０００００

１６０７

１４１５

５３３

１．６

１．４

５００１０１００００００．５

ＰＨＡ剂量与分裂指数呈曲线关系（图１），

ＰＨＡ　２００ｍｇ／ｋｇ体重时脾脏细胞分裂指数是

对照组的９倍，骨髓细胞分裂指数是对照组的

表３，４所示，ＰＨＡ各剂量组诱发脾脏和

骨髓ＰＣＥＭＮ及ＣＡ频率与相应对照组自发

频率比较均无差异（Ｐ　＞　０．０５），故作者认为

ＦＨＡ剂量在５０－２００ｍｇ／ｋｇ体重范围内对小

鼠脾脏和骨髓细胞染色体无损伤，对脾脏、骨髓

９．３倍，此量是最佳有效剂量，小鼠亦无不良反

应（表２）０

（二）不同剂量ＰＨＡ对小鼠脾脏和骨髓

ＰＣ　ＥＭＮ及ＣＡ的影响

ＭＮ试验和ＣＡ分析无直接影响。

ｃ）不同荆最１ｒｉｍｃ对小鼠脾脏、骨髓

ＰＣＥＭＮ和ＣＡ的影响

为了验证注射ＰＨＡ小鼠对已知诱变剂检

测ＭＮ与ＣＡ的有效性，我们选用ＭＭＣ，观

田１　ＰＨＡ对小鼠脾脏、骨髓细胞分裂指数的剂量效应曲线

．一．脾脏；Ｏ一Ｏ骨髓。

（球

勺

翻

犯

秘

众

理

耳

翌

取

户翅

盘

掘

哈

ＰＨＡ（ｒｕｇ／ｋｇ体重）

察它对小鼠脾脏、骨髓ＰＣＥＭＮ和ＣＡ的影

响（表５，６）。图２，３表明ＰＣＥＭＮ和ＣＡ频

率随着ＭＭＣ剂量的增加而增高，而且随着

ＣＡ频率的增高ＭＮ频率亦增高（图４），均呈

正相关，相关系数ｒ１，　ｒ２，　ｒ３，　ｒ４，　ｒ５，　ｒ。间比

较无差异（Ｐ　＞　０．０５），　ｔｒ（Ｈ，：ｐ二０）和ｔｂＸ

（Ｈｏ：月ａ０）是相同的，即ｔｒ－ｔｂ，回归系数

间亦无显著差异（Ｐ　＞　０，０５）。结果表明活体

小鼠遗传毒理学检测中，ＭＭＣ诱发小鼠脾胜

和骨髓ＰＣＥＭＮ与ＣＡ的剂量效应是一致

．１９、