2024年5月19日发(作者：联想win7笔记本)

热带作物学报２０１２，３３（８）：１４０９—１４１１　

Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｃｒｏｐｓ　

香蕉叶片微管免疫荧光染色方法的建立与应用　

乔　飞－，曹晶潇　，江雪飞　，徐　立　

・裹　农业部华南作物基因资源与种质创制重点开放实验室　鏊薯薯　翥　磊錾錾海南儋州５７１７３７　

２海南大学园艺园林学院．海南海口　５７０２２８　

摘要　以香蕉幼叶为材料．通过优化间接荧光免疫染色流程，建立了香蕉微管显微观察方法。结果如下：在　

微管稳定缓冲溶液中加入３７　ｇ／Ｌ的多聚甲醛，１０　ｍＬ／Ｌ的Ｔｒｉｔｏｎ　ｘ一１００，１０　ｍＬ／Ｌ的甘油以及１０　ｍＵＬ的ＤＭＳＯ作　

为固定液．固定６０　ｍｉ　，可以保持微管骨架的原有形态；水解细胞壁３０　ｍｉｎ，可使抗体有效通过细胞壁。进一　

步用镰刀菌酸处理香蕉叶片后发现：微管骨架出现解聚和断裂，呈现出典型的抗性响应特征，暗示微管骨架参　

与了香蕉和枯萎病病原镰刀菌的互作。　

关键词香蕉；微管；荧光免疫染色；细胞骨架；镰刀菌酸　

中图分类号￥６６８．１　文献标识码　Ａ　

Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ　Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ　Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　

ｆｏｒ　Ｂａｎａｎａ　Ｌｅａｆ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ａｐｐｌｉａｎｃｅ　

ＱＩＡＯ　Ｆｅｉ　，ＣＡＯ　Ｊｉｎｇｘｉａｏ　，ＪＩＡＮＧ　Ｘｕｅｆｅｉ　，ＸＵ　Ｌｉ　

１　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｃｒｏｐｓ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｈｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　

ｏｆ　Ｃｒｏｐ　Ｇｅｎｅ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ　Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｃｈｉｎｏ，Ｄａｎｚｈｏｕ．Ｈａｉｎａｎ　５７１７３７．Ｃｈｉｎａ　

２　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｌａｎｄｓｃａｐｅ　Ａ　ｒｅｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，Ｈａｉｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｉｋｏｕ，Ｈａｉｍｍ　５７０２２８，Ｃｈｉｎａ　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ　ｔｏ　ｖｉｓｕａｌｉｚｅ　ｔｈｅ　ｍｉｅｒｏｔｕｂｕｌｅ　ｅｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ　ｏｆ　ｂａｎａｎａ　ｌｅａ￣Ｉｔ　ｗａｓ　

ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　６０　ｍｉｎ　ｆｉｘａｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｆｉｘａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　３．７％ｐａｒａｆｏｒｍａｄｅｈｙｄｅ．１％ｔｆｉｘｏｎ　ｘ一１００，１％ｇｌｙｃｅｒｏｌ　ａｎｄ　

１％ＤＭＳＯ　ｗａｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｍａｉｎｔａｉｎｉｎｇ　ｔｈｅ　ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ　ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ；ａｎｄ　３０　ｍｉｎ　ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ　ｃｏｕｌｄ　ｆａｃｉｌｉｔａｔｅ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　

ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ　ｃｅｌｌ　ｗａｌｌ；ｆｕｒｔｈｅｒ，ｔｈｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ　ｗａｓ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｗｈｅｎ　ｃｈａｌｌｅｎｇｅｄ　ｂｙ　ｆｕｓａｒｉｃ　ａｃｉｄ；ａｎｄ　

ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ　ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ　ｆｒａｇｍｅｎｔｉｎｇ，ｉｎｄｉｃａｔｉｎｇ　ｔｈａｔ　ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ　ｗａｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｂａｎａｎａ　ｃｅｌｌ　

ａｎｄ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ　ｆ．ｓｐ．ｃｕｂｅｎｓｅ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｂｂａｎａｎａ；Ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ；Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｅｅ；Ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔｏｎ；Ｆｕｓａｒｉｅ　ａｃｉｄ　

ｄｏｉ　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—２５６１．２０１２．０８．０１４　

微管骨架（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ）在植物中普遍存在，其　于微管的重组和抗性紧密相关．微管的显微观察一　

基本功能是对细胞结构起支架作用．在细胞分裂间　

直是细胞生物学中最为活跃的研究领域之一　本研　

期，微管骨架的排列主要有以下几种形式：（１）平　

究以香蕉叶片为材料，通过优化固定液配方、摸索　

行排列：在细胞伸长和膨大的过程中，位于细胞膜　

固定时间和酶解时间．建立了香蕉叶片间接荧光免　

内侧的膜下微管清晰可见．多垂直于细胞纵轴平行　

疫显微观察的方法．并进一步观察了枯萎菌酸对微　

排列．排列方式和细胞伸长和膨大的方向紧密相　管骨架组织形式的影响　

关；（２）发散状排列和网状排列：发散状的微管骨　

架贯穿细胞质将平行排列的膜下微管和缠绕在细　

１材料与方法　

胞核上网状微管连结起来［１１　这些不同类型的微　

１．１材料　

管，连接成为贯穿细胞的一个整体．不仅是支撑细　

供试植物材料为香蕉（Ｍｕｓ０　ＡＡＡ　ＧｒｏｕＤ　Ｃａｖｅｎｄｉｓｈ　

胞、维持细胞形状的重要结构．还广泛参与了细胞　Ｗｉｌｌｉａｍｓ）嫩叶　

信号转导、大分子的运输等生理过程　微管骨架在　

ｌ－２方法　

受到外界信号刺激的时候．可迅速做出响应　比如　

微管间接荧光免疫染色观察方法包括如下流程　

在感受到低温阁、高渗ｌ３Ｊ等无机胁迫和病害侵袭等　

１．２．１　固定　将样品叶片切成０．５　ｃｍ￣Ｏ．５　ｃｍ的小　

生物胁迫＿４Ｊ信号时，微管骨架迅速解聚并重组　由　

块，迅速转入固定液中，固定液为含有３７　ｇ／Ｌ多聚　

收稿日期：２０１２—０６—０５　修回日期：２０１２—０７—１０　

基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（Ｎ０．ＰＺＳ０７９）；农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室开放基金项目（Ｎ０

．　

ＫＦＫＴ一２０１０—０５）。　

作者简介：乔　飞（１９７７年一），博士，副研究员。研究方向：植物分子细胞生物学。　通讯作者：江雪飞

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Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｎｊｉａｎｇｘｕｆｅｉ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ。