2023年7月30日发(作者：)

开题报告

生物技术

葡萄叶片总蛋白的提取和定量分析

1．课题研究意义及国内外研究现状

1.1国内外研究现状：随着拟南芥、水稻、杨树等植物全基因组序列测定的完成和植物基因组学研究的不断深入，蛋白质组学研究越来越受到人们的关注，并成为后基因组时代的重要研究领域[1]。蛋白质组（proteome）一词是由澳大MarcWilkinsElctrophoresis杂志上首先提出[2]。蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象，从整体蛋白质水平上，在一个更加深入、更加贴近生命本质的层次上去探索和发现生命活动的规律[3]。蛋白质组的研究手段很多，主要技术有基于电泳和色谱的分离技术；与数据库搜索相结合的同位素标记定量质谱、荧光差异凝胶电泳、电喷雾串联质谱（ESI-MS/MS）等蛋白质定量和鉴定技术[4]。其中双向凝胶电泳是其中核心的手段，19世纪，O’Farrell[5]对大肠杆菌的提取物进行了双向凝胶电泳分析。之后双向电泳渐渐发展成有效的多位分离技术之一。其原理是根据蛋白质的等电点和质量不同，第一向为等点聚焦电泳，第二向为了SDS-PAGE分离，把复杂的蛋白质在一个平面内分离。双向电泳的关键因素是精细的样品的准备，对于不同性质不用目的实验能重复的使用。一般会建立双向电泳的数据库，包括蛋白质的电泳图谱，蛋白的生理，病理指标。除了这些，双向电泳技术还用于蛋白质差异的鉴定。分辨率是蛋白质组分离的重要参数，PH梯度胶的出现使的双向电泳克服了分辨率不够的缺陷。在很窄的PH范围，甚至一个PH单位内，可进行重复的多次分析，得到比较多的蛋白质斑，大大提高了蛋白质分离的科学性。最近发展了一种荧光染料标记的向电泳技术即凝胶内差别电泳（DIGE）[6]。

近年来蛋白质组研究技术已被应用到生命科学基础研究的各个领域，如细胞生物学、神经生物学等。

1.2课题研究意义：提取植物蛋白质的方法在现代技术中已经越来越广泛地被应用在各种作物上,但葡萄上应用相对较少，本实验在以三种方法提取鄞红和美人指2种葡萄叶片的蛋白质，为葡萄叶片总蛋白质提取提供方式。

2．课题研究的主要内容、预期目标和研究方案

主要内容：以鄞红和美人指2种葡萄叶片为才材料，通过丙酮法，酚法，试剂盒法3种方法对材料进行蛋白质提取，并且进行定量分析。

预期目标：提取和检测鄞红和美人指葡萄叶片的总蛋白。

研究方案：以鄞红和美人指2种葡萄叶片为才材料，通过丙酮法，酚法，试剂盒法3种方法对材料进行蛋白质提取，并用蛋白质检测的试剂盒法测量提取出蛋白质的吸光度，建立标准 曲线，进行蛋白质量的计算。最后做出分析。

3．课题进度计划

2011.07-2011.08：完成实验方案

2011.08-2011.09：整理分析文献资料及数据，构建论文框架

2011.10-2011.11：完成三种方法对蛋白质的提取和定量分析

2011.11-2011.12：完成毕业论文初稿

2012.03-2012.05：修改、完善毕业论文，正式确定毕业论文成稿

4．参考文献

[1] 张根连,范术丽,宋美珍,等.植物蛋白质组学技术研究进展[J].生物技术通报,2011(7):26-31.

[2] Wasinger VC,CordwellSJ,CeqDa·Poljak A,et ss with geneproductmapping of the

Mollicutes;Mycoplasma genitalium.[J].Electrophoresis,1995,16:1090-1094.

[3] 梁宇,荆玉祥,沈世华.植物蛋白质组学研究进展[J].植物生态学报,2004,28(1):114-125.

[4] 刘立国.陆慧君.蛋白质组分析技术研究进展[J].动物医学进展,2008,29(1)l 64-69.

[5] O'Fanell resolution two-dimensional electrophoresis of proteins.[J].Biol

Chem,1975,250:4007-4021.

[6] Zhou G,Li H,Decamp D,et al.2D differentiaI in-geI eIectrophoresisfor the identification of

esophageaI scans ceII cancerspecificprotein markers[J].MoI CeII Proteomics,2002,(2):117-124.