Vazyme 产品特点概述与常见问题解决方案(纵)|江阴雨辰互联

2023年7月29日发(作者：)

PCR

Taq， Taq Plus，LAmp

【简述】这三个产品都属于Taq类别的产品，后两种是在Taq基础上开发出来的改良版的Taq酶，都属于低保真度类型的检测鉴定用酶。

【特点】

Taq，最常用的分子生物学试剂，扩增长度一般都为2kb以内。适用于一些基本的检测鉴定试验，非常常用，市场极大。

Taq Plus，改良版的Taq酶，提高了扩增效率和扩增能力，扩增产量高于Taq，对基因组或者cDNA等复杂模板适应度高于Taq。扩增长度为简单模板（质粒等）20kb以内，复杂模板（基因组或者cDNA）10kb以内。

LAmp，改良版的Taq酶，提高了Taq酶对长片段的扩增能力。性能和Taq Plus类似。（可以和Taq Plus替换使用）

【改良原理】

Taq酶虽然扩增能力很强，但是因其无校对活性，所以扩增错配较多，尤其是对于长片段扩增而言，错配碱基将导致Taq酶与模板的解离，因此其扩增长度往往只能到2kb。为了克服这一缺点，Vazyme将Taq酶改造，使其拥有了适度的校对活性，有效解决了这一问题。

【常见问题】

1. 扩增模板（纯度完整度）

2. 扩增引物（是否降解，是否成功使用过）

3. 扩增程序（标准程序参见说明书）

4. TA克隆的问题：如果用户扩增后续实验要做TA克隆，推荐用户使用Taq，因后两种酶做TA克隆的效率要低于Taq酶。

【产品优势】

技术壁垒相对简单，因此主要优势在于价格和稳定性。

AceTaqTM

【简述】这个产品也属于Taq类别的产品，是在Taq基础上开发出来的改良版的Taq酶，都属于低保真度类型的检测鉴定用酶。

【特点】

AceTaq，热启动版本的（Hot-Start）Taq酶。常温下以及预变性之前的升温阶段完全没有聚合酶活性。只有在95℃加热5分钟之后才能释放酶活转变为Taq酶。该产品较Taq而言，具有更高的扩增特异性。因此扩增条带更单一，扩增所需要的模板量更低（个位数拷贝的基因组也可正常扩增）。但是少数情况下，该酶的扩增效率略低（相对于Taq而言）属正常情况。扩增长度和taq酶一样，一般要求小于2kb。

【改良原理】

非特异性扩增对于Taq酶扩增而言，有两个负面效应：一是非特性扩增的存在会干扰后续实验；二是非特异性扩增的存在会减弱目标扩增的效率，导致目标扩增产无量降低甚至消失。简而言之，非特异性扩增时PCR反应的毒药。

PCR过程中非特异性扩增主要产生于反应体系配制和预变性升温阶段，只要让这一过程中Taq酶没有聚合酶活性就可以有效抑制非特异性扩增。Vazyme使用化学修饰的方法修饰了Taq酶，得到的AceTaq在常温下和预变性升温阶段完全没有酶活。和其他公司采用的单克隆抗体封闭酶活相比，化学修饰法对酶活的封闭更完全，热启动更严谨，因此扩增更特异。

【常见问题】

1. 扩增模板（纯度完整度）

2. 扩增引物（是否降解，是否成功使用过）

3. 扩增程序（标准程序参见说明书，预变性必须超过5分钟，用于充分释放酶活）

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【产品优势】

特异性更高，检测下限更低（正常扩增需要的最低模板量）

PhantaTM

【简述】基于pfu的第三代超保真聚合酶，保真度是普通taq酶的50多倍。用于需要保真度的PCR扩增。

【特点】

1.快：极限速度1秒钟2.5kb。推荐用户15秒/kb

2.长：保真度越高的酶扩增能力越差，phanta克服了这一点。简单模板30kb，复杂模板10kb，广泛适用。

3. 保真度高：Taq酶的50多呗，Pfu的6倍

4. 扩增能力强：对模板的解读能力强，扩增产量高，广泛适用于各种类型模板。

【改良原理】

保真度越高的酶扩增能力越差，因此一般高保真酶对于长片段、复杂模板都无法有效扩增。Vazyme对pfu做了系统的蛋白工程改造，显著提高了pfu对模板的亲和力和行进性。此外，Vazyme对Phanta的反应缓冲体系进行了反复优化，并添加了扩增增强子，有效的去除了高保真酶容易dUTP中毒的问题。因此，phanta聚合酶无论对于短片段还是长片段，简单模板还是复杂模板都具有优异的扩增能力。

【常见问题】

1. 扩增模板（纯度完整度）

2. 扩增引物（是否降解，是否成功使用过）

3. 扩增程序（延伸时间不能超过30秒/kb）

【产品优势】

保真度高、扩增速度快、长片段扩增能力强、扩增产量高、扩增特异性强、模板适应性广

PCR Enhancer

【简述】PCR扩增增强剂混合液，任何PCR用酶都适用

【特点】

1. 提高GC-Rich片段扩增能力

2. 提高具有高级结构的片段的扩增能力

3. 有时候可以让不能扩的便能扩，能扩的变得扩的更好；当然也有让能扩的变得不能扩的时候。建议用户在无法正常扩增时尝试。

【改良原理】

多种PCR增强剂混合物

【常见问题】

有时候可以让不能扩的便能扩，能扩的变得扩的更好；当然也有让能扩的变得不能扩的时候。建议用户在无法正常扩增时尝试。

使用后聚合酶的保真度可能会降低！建议用户酌情使用

【产品优势】

一个非常神奇的溶液，兼容所有的PCR用酶

RT-PCR

RNA Keeper Tissue Stabilizer

【简述】细胞、组织日后用于RNA提取，推荐用户将其保存在该溶液中

【特点】细胞、组织高稳定性保存液，可以有效抑制存贮过程中RNA的降解。

【改良原理】

RNA是逆转录（RT）反应的模板，因此其质量直接决定逆转录是否成功。因为RNA酶非常强悍，因此RNA极易被降解，这将导致逆转录无法完成。为了保证RNA的完成性，新鲜细胞、组织离体后因迅速提-2-

取。如果无法立即提取，因将细胞组织用合适的方法保存，避免RNA的降解。该产品为多种RNA抑制剂的混合物，可高效抑制RNAase酶活性，进而提高细胞、组织保存成功率。新鲜组织在该溶液中可以实现：37 ℃保存1天，25 ℃保存1周，4 ℃保存4周，-20 ℃/-80 ℃长期保存后RNA无降解。

【常见问题】

保存效果不佳

推荐用户将组织块剪碎之后再泡在该产品里。

【产品优势】

和进口的相比便宜{RNAlater，Ambion}，而且性能非常稳定

RNA isolater Total RNA Extraction Reagent

【简述】总RNA提取试剂，也叫TRIZOL

【特点】系统成熟，重复性好，成本低

【改良原理】无改良

【常见问题】

1. 样品保存：新鲜的组织或细胞如果不是立刻提取需液氮速冻后-80度保存

2. 提取问题：A：组织、细胞样品不宜太多

B：基因组污染：氯仿抽提步骤低温离心；上清吸取不宜太完全

C：组织样品破碎方式：最好为匀浆或者液氮研磨

【产品优势】

和进口的相比便宜，而且性能非常稳定

Murine Rnase inhibitor

【简述】逆转录反应可能会用到的RNA酶抑制剂

【特点】

高抗氧化能力（非常稳定），重组表达（纯度非常高），无需高浓度DTT存在（与RT-PCR/qPCR反应体系高度兼容）

【改良原理】

1. 更换人来源的为鼠来源的

2. 可溶性重组表达

【常见问题】

暂无

【产品优势】

和进口的相比便宜，而且性能非常稳定

HiScript Reverse TranscriptaseTM

【简述】在MLV（H-）基础上改造而成的高效逆转录用酶

【特点】

1. 热稳定性高，最高可耐受55℃的反应温度（有效消除RNA二级结构对逆转录反应的影响）

2. 高效逆转录，和同类产品相比在50℃拥有最高的cDNA产量

3. 增强了与RNA模板的亲和力，一方面可获得更多全长的cDNA产物；令一方面提高了逆转录灵敏度，可以检测低至1pg的总RNA

4. 具有更高的逆转录保真度，减少了逆转录过程中错配的可能性

【改良原理】

逆转录过程中最常见的问题就是RNA二级结构了。如果逆转录在较低的温度下进行，RNA的二级结构往往会导致逆转录反应的提前终止；如果逆转录反应在高温下进行，常规的逆转录酶又极容易失活。因此，Vazyme对MLV进行了系统的工程学修改。首先提高了其耐高温能力，这样逆转录反应就可以在更高的温-3-

度下进行，显著减弱了RNA高级结构对逆转录反应的影响。其次，我们提高了MLV对模板的亲和力，使得等多的全长cDNA可以被成功合成，因此HiScript具有非常高的灵敏度，可以有效检测低至1pg的总RNA，使得少量模板以及低拷贝基因的逆转录也能正常完成。最后，我们在MLV的基础上进一步提高了其逆转录保真度，减少了逆转录过程中错配的可能性。

【常见问题】

1. RNA模板（纯度完整度）

2. 逆转录引物（是否降解，是否成功使用过）

3. 逆转录程序（参见说明书要求）

4. cDNA扩增体系是否正常工作

【产品优势】

高温逆转录、检测灵敏度、逆转录保真度高

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit ( For qPCR)

【简述】包含HiScript的第一链cDNA合成试剂盒

【特点】1. 酶的特点同HiScript

2. 试剂盒特点：

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit：反应所需要的酶合并为Enzyme Mix，所需要的缓冲液及dNTP合并为2 X Reaction Mix，只需要加入模板和引物（用户自备，Oligo dT，随机引物或者基因特异性引物均可）即可开始反应。使用便捷。

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit( For qPCR)：反应所需要的酶合并为qRT Enzyme Mix，所需要的缓冲液、dNTP、引物合并为2 X qRT Mix，只需要加入模板即可开始反应。其中2 X qRT Mix中的引物为Oligo dT引物和随机引物的混合物，使逆转录cDNA更适合后续qPCR反应。

【改良原理】

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit：合并组分，简化操作。反复测试提高稳定性。

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit( For qPCR)：

1. 合并组分，简化操作。反复测试提高稳定性。

2. Oligo dT或者随机引物单独进行逆转录时，RNA链的不同位置逆转录效率很不均匀，不利于qPCR对基因量的准确测定。该试剂盒提供了混合引物做为逆转录引物（经过反复优化），消除了逆转录的不均匀性。

【常见问题】

同HiScript常见问题

【产品优势】（基本优势和HiScript一样，此外试剂盒还有如下优势）

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit，使用便捷

HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit ( For qPCR)，使用便捷，更适合qPCR

qPCR

AceQ qPCR Master Mix

【简述】使用AceTaq配制的荧光定量专用MIX，分为染料法和探针法两版本

【特点】1. 酶的特点同Ace Taq

2. Mix特点：

染料法：反复调整的优化体系。具有超强的适应性。扩增高度特异，非特异性扩增和引物二聚体较同类产品优势巨大。线性范围广、实验重复性好、检测灵敏度高，对GC-rich和有高级结构的片段有良好的兼容性。

探针法：反复调整的优化体系。具有超强的适应性。扩增高度特异，非特异性扩增和引物二聚体较同类产品优势巨大。线性范围广、实验重复性好、检测灵敏度高，对GC-rich和有高级结构的片段有良好的兼容性。

【改良原理】

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酶方面的改良：参见AceTaq（热启动增强扩增特异性和检测灵敏度）

Mix的改良：Mix版本具有高度的稳定性，长期存放没有问题。反应缓冲体系针对染料法和探针法都做了反复测试优化，兼容性好，性能超群。

【常见问题】

1. 扩增模板（纯度完整度）

2. 扩增引物探针（是否降解，是否成功使用过）

3. 扩增程序

4. 仪器设置是否正确（软件较复杂，容易出错）

【产品优势】

酶方面的优势：参见AceTaq，主要是严格热启动和扩增高度特异

Mix方面的优势：贮存稳定，反应体系经过反复优化，有效提高了兼容性和扩增特异性（添加有独特配方的扩增增强因子）

克隆相关

pEM-T/pUM19-T/ pUM19- Simple T

【简述】TA克隆专用载体，都可以进行蓝白斑筛选

【特点】1.克隆成功率高

2. 自连背景低

3. pEM-T和pUM19-T两种不同的载体骨架，多克隆位点的酶切位点不同；pUM19- Simple T在pUM19-T的基础上删除了多克隆位点。用户可根据需要自行选择。

【改良原理】

常规的T载体是使用平端的线性化载体末端加T制成。这种方式加T的效率很低，因此最终载体中有很多末端都没有T。一方面，这会导致连接成功降低；另一方面也会使载体自连背景升高。Vazyme修改了T载体的生产工艺，使用一种更先进的方法生产T载体，最终Vazyme的T载体中超过99%的DNA片段末端都带有碱基T。因此有效解决了成功率低和自连率高的问题。

【常见问题】

1. 克隆片段越长，成功率越低（大于3kb的片段应鉴定24个以上的单克隆）

2. 高保真酶PCR扩增产物，应先加A再克隆。（但是加A效率很低，所以克隆成功率会下降，自连率会上升。Phanta PCR产物不能直接加A，应先将扩增产物纯化后再加A）

3. 感受态效率低（应超过106cfu/ug）

【产品优势】

自连率低

成功率高

便宜

T4 DNA ligase

【简述】DNA连接酶

【特点】高纯度，高活性

【改良原理】

重组表达。先进的纯化工艺，酶的纯度极高；无核酸酶污染。

【常见问题】

暂无

【产品优势】

纯度高、活性高

ClonExpress

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【简述】重组克隆系统

【特点】1.片段无需酶切消化，操作简单，不受酶切位点选择限制

2. 克隆效率高，自连背景低（体系中无连接酶，单切载体无需脱磷酸）

3. 无缝克隆首选

4. 可进行多片段无缝克隆、点突变等高级实验

【改良原理】

用先进的同源重组方式代替传统的酶切连接方式进行载体构建。因此，克隆构建不再受酶切位点选择限制。可以向任意载体的任意位置插入目标片段，插入位点有无酶切位点都可以。因克隆方式为同源重组，因此片段与载体或片段与片段之间（多片段拼合时）的连接没有任何多余序列。克隆方式灵活，载体插入、删除、突变等试验都可以使用ClonExpress一步完成。

【常见问题】

1. 引物设计是否正确

2. 片段载体的DNA的量需要按照说明书要求加入（一定要跑胶检测浓度）

3. 插入片段PCR产物必须纯化（一定要去除dNTP）

4. 感受态效率要求107cfu/ug

【产品优势】

参见产品特点。一个全新的克隆系统，应用前景非常广阔

Mut Express

【简述】全新DNA定点突变系统

【特点】1. 独特的引物设计方式，指数扩增，PCR更容易进行

2. Phanta超保真扩增模块，扩增能力强，速度快，保真度高

3. ClonExpress重组环化系统，扩增产物体外高效环化