2024年5月19日发(作者：摩托罗拉明a1200)

K599TY培养基配制方法

1.取-80℃保存的K599发根农杆菌感受态，置于室温或手心片刻，待其部分融化、处

于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μL感受态加入0.01-Lμg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预

实验确定所加质粒的量），用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中

静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。

3.冰浴中拿出放室温，加入700μL无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小

时。

4.6000rpm离心一分钟收菌，留取100μL左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应

抗生素的TY平板上，倒置放于28℃培养箱培养2~3天。

●TY配方（1L）：

Tryptone 5g

Yeastextract 3g

补水到1L体积，完全溶解后，121℃、20分钟高温灭菌。

配制1M的氯化钙水溶液，121℃、20分钟高温灭菌。

每1L灭菌的TY液体营养液中加入10ml无菌的1M氯化钙水溶液即可。

若配制TY固体培养基，则加入15g琼脂粉。

注意事项：

1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，

转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

2.混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，

与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

3.平板上阳性克隆密度过大时，会造成营养不足，使阳性克隆生长变慢，菌落变小。

为获得更大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。

4.K599具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。