2024年5月2日发(作者：hd7770相当于什么显卡)

Calbiochem

®

FragEL™ DNA Fragmentation Detection Kit,

Colorimetric -TdT Enzyme

目录货号QIA33

背景介绍：

背景介绍

：

细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象，在生物体进化、内环境的稳定以及系统发育中发挥着

重要的作用。细胞凋亡发生在正常的细胞周期循环中，并发生形态学和生理生化的特征性改变，比

如细胞皱缩，细胞间连接消失，线粒体膜电位消失，通透性改变，核质浓缩，核膜核仁破碎，DNA

降解成为约180bp-200bp的片段；胞膜有小泡状突起，膜内侧磷脂酰丝氨酸外翻到膜表面，胞膜结

构仍保持完整，最终凋亡细胞遗骸被分割包裹为几个凋亡小体，并迅速被周围专职或非专职吞噬细

胞吞噬。以上改变发生在不同的细胞凋亡阶段。

检测原理：

检测原理

：

在凋亡晚期细胞中，DNA会被降解为不同大小的片段，正常的或正在增殖的细胞则几乎没有

DNA的断裂，该方法是将生物素（Biotin）标记和未标记的dNTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT

酶）的作用下，连接到凋亡细胞中断裂DNA片段的3’-OH末端，然后再用亲和素（Streptavidin）标

记的HRP与标记上的Biotin-dNTP结合，并通过DAB显色后用显微镜检测凋亡细胞。试剂盒对标试剂盒对标

记反应进行了优化，

记反应进行了优化

，采用最佳比例的生物

采用最佳比例的

生物素标记和未标记的

生物

素标记和未标记的dNTP进行3’-OH末端的核苷酸掺入，

末端的核苷酸掺入

，

使得同一个断裂的DNA片段末端可以形成更长的

片段

末端可以形成更长的“

末端可以形成更长的

“标记尾巴”

标记尾巴

”，该“标记尾巴”

标记尾巴

”减少了相邻掺入

dNTP上标记基团的空间位阻，

上标记基团的空间位阻

，增加每个断裂片段后的标记

增加每个断裂片段后的

标记基团数目

标记

基团数目；

基团数目

；同时生物素和亲和素的高亲

和力也可以提高检测灵敏度提高检测灵敏度，减少非特异性反应。

和力也可以提高检测灵敏度，减少非特异性反应。

此外试剂盒中附有复染用甲基绿便于从形态学上

分辨评估正常细胞和凋亡细胞。

检测次数：

检测次数

：

50次

检测方法：

检测方法

：

光学显微镜

样本类型：

样本类型

：

石蜡包埋组织切片、组织冰冻切片、固定细胞片

种属反应：

种属反应

：一

系列不同种属

储存与运输条件：

储存与运输条件

：

试剂盒需用干冰运输并储存在-20℃非无霜冰箱中。第一次融化后，终止缓冲液

和复染用甲基绿需放于室温储存，封闭缓冲液需放于4°C储存。然而，再次冷冻后并不明显影响这

些缓冲液的使用效果。

默克生命科学服务热线：

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：400-820-8872 邮箱：

邮箱

：bioteam@

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图1. 试剂盒检测原理图

试剂盒组分：

试剂盒组分

：

（1）蛋白酶K（PROTEINASE K）：2mg/ml的蛋白酶K溶解在10mM Tris溶液中（pH8.0）；用来

消化细胞，增加样本的通透性。

（2）5×TdT平衡缓冲液（5X TdT EQUILIBRATION BUFFER）：

1 M Sodium Cacodylate，0.15

M Tris，1.5 mg/ml BSA，3.75 mM CoCl

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，pH 6.6；

使用前需5倍稀释。

（3）生物素片段末端标记反应混合物（Biotin-FragEL

TM

LABELING REACTION MIX）：3管；生

物素标记和未标记的脱氧核糖核苷酸以最佳的比例混合，在末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT酶）

的作用下标记DNA片段末端。

（4）终止缓冲液（STOP BUFFER）：0.5M EDTA，pH8.0。

（5）封闭缓冲液（BLOCKING BUFFER）：4% BSA溶于PBS溶液中。

（6）50×偶联物（50×CONJUGATE）：50×链霉亲和素标记过氧化物酶偶联物。

（7）DAB片：HRP底物，0.7mg/片。

（8）双氧水/尿素片：1.6mg/片。

（9）甲基绿：0.3%复染用甲基绿。

（10）TdT酶（TdT ENZYME）：将标记和未标记的脱氧核糖核苷酸掺入断裂的DNA 3’-OH末端。

注意：TdT酶在-20℃保存时不会凝固，因此不需要提前取出融化，只需在使用前迅速从-20℃冰箱中

拿出取用后立即放回-20℃保存。

（11）HL-60细胞阳性/阴性对照片：提供两张相似的固定细胞甩片，都是用0.5µg/ml放线菌素D处

理19小时的HL-60细胞，含有已诱导凋亡细胞和未凋亡细胞，可作为凋亡阳性和阴性对照。

注意：其他组分也在使用后尽快放回-20℃冰箱保存。为了避免试剂损失，使用前可以低速短暂离心

融化后的试剂，然后小心开管取用。

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