2024年5月1日发(作者：打不开)

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS60014.2 v.A

GENMED真菌/酵母细胞可溶性总核蛋白制备试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

GENMED真菌/酵母细胞可溶性总核蛋白制备试剂是一种旨在使用生物、化学和物理方法相结合，有效去

除酵母细胞壁，进一步快速且充分裂解酵母细胞，并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下，充分溶解细胞核，然

后通过超速离心，分离并收集所有细胞核内可溶性蛋白质的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学

家精心研制、成功实验证明的。可直接用于转录因子动态监测、核酸蛋白结合凝胶迁移电泳分析（EMSA）、

特定核蛋白后续纯化、蛋白电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等。产品即到即用，性能稳定，操作便

捷，萃取产量和纯度皆佳。

技术背景

通过多种特殊裂解系统和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化内源性蛋白

酶的破坏，充分保留细胞核内蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容

GENMED清理液（Reagent A）

GENMED平衡液（Reagent B）

GENMED酶解液（Reagent C）

GENMED裂解液（Reagent D）

GENEMD强化液（Reagent E）

GENMED溶解液（Reagent F）

GENMED活性液（Reagent G）

产品说明书

毫升

毫升

毫升

毫升

毫升

微升

1份

毫升

保存方式

保存GENMED酶解液（Reagent C）和GENMED活性液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃

冰箱里，有效保证6月

用户自备

50毫升锥形离心管：用于酵母细胞操作的容器

1.5毫升离心管：用于酵母细胞蛋白操作的容器

4℃台式离心机：用于细胞和蛋白收集以及去除杂质

4℃微型台式离心机：用于细胞和蛋白收集以及去除杂质

恒温水槽：用于孵育细胞反应

组织匀浆器：用于裂解酵母细胞

4℃摇床：用于细胞核裂解孵育

1

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的GENMED活性液（Reagent G）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后

移出 微升GENMED溶解液（Reagent F）到1.5毫升离心管，加入 微升GENMED活性液（Reagent G），

充分混匀，置于冰槽里，标记为GENMED溶解工作液。然后进行下列操作。

1． 准备好50毫升新鲜真菌样品

2． 在分光光度仪上测OD

600

为1（1 OD＝1 X 10

7

细胞/毫升；总量为5 X 10

8

细胞）

3． 转移到预冷的50毫升锥形离心管

4． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

5． 小心抽去上清液

6． 加入 毫升GENMED清理液（Reagent A），混匀

7． 放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

8． 小心抽去上清液

9． 加入 毫升GENMED平衡液（Reagent B），混匀

10．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

11．小心抽去上清液

12．加入 毫升GENMED平衡液（Reagent B），混匀

13．加入 微升GENMED酶解液（Reagent C），混匀

14．放进30℃恒温水槽孵育60分钟，期间每隔15分钟轻轻用手摇匀

15．加入 毫升GENMED平衡液（Reagent B），混匀

16．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

17．小心抽去上清液

18．加入 毫升GENMED平衡液（Reagent B），混匀

19．放进30℃恒温水槽孵育30分钟，继续实验步骤21

20．同时将GENMED平衡液（Reagent B）置入冰槽里预冷 分钟

21．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

22．小心抽去上清液

23．加入 毫升预冷的GENMED平衡液（Reagent B），混匀

24．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为3000g

25．小心抽去上清液

26．加入 微升GENMED裂解液（Reagent D）

27．涡旋震荡5秒，充分混匀

28．选择下列其中一种方法：

方法一：物理匀浆处理

29．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化40下（注意：

参见注意事项7

）

30．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管

31．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g

32．小心移出上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

33．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为2000g

34．（选择步骤）重复实验步骤32至33（去除丝状体）

35．小心移出上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

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