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• 356 •

J

Southeast

Univ

(

Med

Sci

Edi

)

i

秦太孝孝裉（医学版）

2017,

Jun

；36(3) ：356-360

precluding histone tail modifications required for heterochroma­

tin formation[ J]. Genes Dev,2002,16(4)

：

479~489.

[5]

汪渊

.

蛋白甲基化修饰酶

SET7/9

对

P53

缺失人肺癌细胞

甲基化作用或增加（如

p

53

、ER

a

)或降低（如

p

65、

DN

-

MT

1)蛋白稳定性，或促进其空间变构（如

AR

),继而

改变它们的转录活性，影响靶基因表达[3]，这会诱发不

同类型细胞不同的细胞生长与行为学效应。通过深入

研究

SET

7/9调控肝癌细胞的增殖、凋亡和迁移的具

体机制，有望让

SET

7/9成为新的肝癌诊断生物标志

物与治疗药物作用靶点。

[参考文献]

[1 ] SONG P,FENG X,ZHANG K,et al. Screening for and surveil­

lance of high-risk patients with HBV-related chronic liver dis­

ease ：promoting the early detection of hepatocellular carcinoma

in China[ J]. Bioscience Trends,2013 ,7(1)

：

1~6.

[2] ANWAR S L, LEHMANN U. DNA methylation, microRNAs,

and their crosstalk as potential biomarkers in hepatocellular

carcinoma [ J ]. World J Gastroenterol, 2014, 20 ( 24

)：

7894-7913.

[3]

高丽丽，余卫平

.PLMT

家族成员

SET7/9

的非组蛋白甲基

的凋亡效应及其机制

[D].

南京

:

东南大学

,2014.

[6] ZHOU J,XIE M,SHI Y,et al. MicroRNA-153 functions as a

tumor suppressor by targeting SET7 and ZEB2 in ovarian canc­

er cells[ J]. Oncology Reports,2015,34(1)

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111-120.

[7] SONG Y,ZHANG J,TIAN T,et al. SET7/9 inhibits oncogenic

activities through regulation of Gli~l expression in breast canc-

er[J]. Tumor Biol,2016,37(7)

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1-12.

[8] KURASH J K,LEI H,SHEN Q,et al. Methylation of p53 by

Set7/9 mediates p53 acetylation and activity

lecular Cell,2008,29(3)

：

392-400.

[9] MUNRO S,KHAIRE N,INCHE A,et al. Lysine methylation

regulates the pRb tumour suppressor protein [ J ]. Oncogene,

2010,29(16)

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2357-2367.

[10] YOSHIMITSU A,YUKI K,SUN-JU B,et al. Reduced expres­

sion of SET7/9,a histone mono-methyltransferase,is associat­

ed with gastric cancer progression [ J ]. Oncotarget, 2015,7

(4)

：

3966-3983.

in vivo[]~.

Mo­

化作用

[J].

生命科学，

2011

，

23(8):773-778.

[4] NISHIOKA K, CHUIKOY S, SARMA K, et al. Set9, a novel

histone H3 methyltransferase that facilitates transcription by

•论

著

.

葛根不同萃取部位对链脲佐菌素致2型

糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究

李亚蓉冯晶

2

，丁胜

1

(1.

华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院内分泌科，湖北武汉

430000;

2.

武汉市第一医院骨外科，湖北武汉

430022)

[

摘要]目的：通过葛根不同苹取部位对链脲佐菌素（

STZ

)诱导的2型糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究，探

索葛根降血糖的主要有效部位。方法

：SD

雄性大鼠高脂高糖饲料喂养1个月后，腹腔注射

STZ

30

mg

•

kg

-1，建立2型糖尿病大鼠模型。将模型大鼠随机分为模型组、盐酸二甲双胍组（0. 11

g

•

kg

-1)及葛根的苹

余部位组、乙酸乙酯部位组、二氯甲烷部位组和石油醚部位组，连续灌胃给药4周。于给药后每周测定大鼠

[

收稿日期

]

2016-08-26

[

修回日期

]

2016-11-29

[

基金项目

]

武汉市卫计委科研项目（

WXWB11)

[

作者简介

]

李亚蓉（

1979-),

女，四川广安人，主治医师，医学硕士。

E-mail:769910409@qq.C〇m

[

通信作者

]

冯晶

E-mail:14590568@

[

引文格式

]

李亚蓉，冯晶，丁胜

.

葛根不同萃取部位对

STZ

致

2

型糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究

[J].

东南大学学报

:

医学版，

2017,36(3):

356-360.

李亚蓉，等.葛根不同苹取部位对链脲佐菌素致2型糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究

• 357 •

空腹血糖（

FBG

)值，眼眶后静脉丛取血测定糖化血红蛋白（

HbAlc

)、空腹血清胰岛素（

FINS

)水平，计算稳态

胰岛素抵抗（

HOMA

-

IR

)指数和胰岛敏感指数（

ISI

)，并对血清中的甘油三酯（

TG

)、总胆固醇（

TC

)、高密度脂

蛋白胆固醇（

HDL

-

C

)、低密度脂蛋白胆固醇（

LDL

-

C

)、游离脂肪酸（

FFA

)水平进行测定。结果：葛根二氯甲

烷部位能明显降低糖尿病模型大鼠

FBG

、

HbAlc

、

FINS

、

HOMA

-

IR

指数、

TG

、

TC

、

LDL

-

C

、

FFA

，升高

ISI

。结论:

葛才艮二氯甲烷部位、乙酸乙酯部位和苹余部位对2型糖尿病大鼠糖脂代谢具有较好的改善作用，其中以二氯

甲烷部位作用最强。

[

关键词

]

葛根；苹取物；糖尿病；大鼠；糖脂代谢

[

中图分类号

]R285.5; R587.l [

文献标识码

]A

doi

：

10. 3969/j. issn. 1671-6264. 2017.03.010

[

文章编号

]167l-6264(2

〇

n)03-

〇

356-

〇

5

Effects of different extraction parts of Radix Puerarin on glucose

and lipid metabolism in type 2 diabetic rats induced by STZ

LI Ya-rong1,FENG Jing2,DING Sheng

(1.

；

1

Department of Endocrinology

,

the Central Hospital of Wuhan, Tongji Medical College, Huazhong University of

Science and Technology, Wuhan 430000, China

2. Department of Orthopedics,

Wuhan No.l Hospital, Wuhan

430022

,China)

[Abstract] Objective

：

To explore the effect of different extraction parts of Radix Puerarin on glucose and lipid me­

tabolism in type 2 diabetic rats induced by STZ. Methods

：

SD male rats were fed with high fat and high sugar diet.

After one month,the intraperitoneal injection of STZ 30 mg • kg-1 was conducted and type 2 diabetic rat model was

established. The model rats were randomly divided into model group, metformin group (0.11 g • kg 1) , Radix Pu-

erariae raffinate site group, ethyl acetate group, dichloromethane fraction group and petroleum ether group, and the

rats were continuously given intragastric administration for 4 weeks. The levels of fasting blood glucose (FBG) , gly­

cosylated hemoglobin ( HbAl c ) and fasting serum insulin ( fins ) were determined weekly and the steady-state insulin

resistance( HOMA-IR) index and insulin sensitivity index (ISI) were calculated. The levels of serum triglyceride

(TG), total cholesterol ( TC ), high density lipoprotein cholesterol ( HDL-C ) , low density lipoprotein cholesterol

(LDL-C) and free fatty acid(FFA) were also measured. Results

：

Dichloromethane fraction of Radix Puerarin sig­

nificantly decreased the levels of FBG, HbAlc, FPG,fins, HOMA-IR,TG,TC , LDL-C and FFA,and increased the

ISI. Conclusion

；

Dichloromethane and ethylacetate extract, and raffinate parts of Puerarin can improve glucose and

lipid metabolism in type 2 diabetic rats,of which the dichloromethane extract shows the best effect.

[Key words ] Puerarin

；

extract; diabetes mellitus; rats; glucose and lipid metabolism

葛根为■科植物野葛[/

G—a

(

Willd

)

葛根对糖尿病模型大鼠降糖降脂的主要有效部位，为

降糖新药制剂的开发及后期的临床应用奠定一定的实

验基础。

Ohrn

]的干燥根，味甘、辛、凉，归脾、胃、肺经,具有解

肌退热、生津止渴、透疹、升阳止泻、通经活络、解酒毒

之功效[1]。葛根早在《神农本草经》中就有“葛根，味

甘，平。主消渴;身大热，呕吐;诸痹，起阴气;解诸毒”

的降血糖记载[2];现代药理研究也表明葛根具有良好

的降血糖效果[3_4]，且对糖尿病所致的胰腺损伤、心脏

损伤、氧化应激损伤及视网膜病变等具有较好的保护

和改善作用[5_8]。本实验从糖脂代谢角度探讨葛根不

同萃取部位对糖尿病大鼠糖脂代谢的影响，旨在探寻

1

材料与方法

药材与试剂

1.1

公司，批号

AAE9241

),链脲佐菌素（

STZ

)(美国

Sigma

公司，批号

SLBB7526V

),糖化血红蛋白（

HbAlc

)试剂

葛根药材（亳州市九泰中药饮片有限公司，批号

150322)

，

盐酸二甲双胍片（中美上海施贵宝制药有限

• 358 •

盒、胰岛素放射免疫分析试剂盒（南京建成生物工程

研究所），血糖试纸条（美迪信，批号

SPF

15

Z

3

B

1)，甘

油三酯(

TG

)试剂盒、总胆固醇(

TC

)试剂盒（温州东欧

津玛生物科技有限公司），高密度脂蛋白胆固醇（

HDL

-

C

)、低密度脂蛋白胆固醇（

LDL

-

C

)及游离脂肪酸

东南大学学报（医学版）2017年6月，36(3)

酸乙酯部位组、二氯甲烷部位组、石油醚部位组和萃余

部位组（均折合成生药1.58

g

•

kg

-1)。灌胃给予大鼠

的盐酸二甲双胍剂量由人体剂量折算后确定，灌胃给

予大鼠的葛根不同萃取部位用量则按2015年版《中国

药典•一部》葛根饮片用量计算。盐酸二甲双胍组及

葛根不同萃取部位组的大鼠均连续给药4周。

1.4.4 一般生理状况观察对大鼠的一般生理状况

(大鼠的饮水量、进食量和活动状态等)进行观察。

1.4.5大鼠

FBG

水平测定分别于给药1、2、3、4周

(

FFA

)(南京建成生物工程研究所），其余试剂均为分

析纯。

1.2

动物

SD

大鼠80只，雄性，清洁级，体重250

g

左右，由

江苏大学动物实验中心提供，合格证号：

SCXK

(苏）

2009_0002。饲养室温度及相对湿度适宜，予12

h

光

照和黑暗循环，自由摄食和饮水，适应性饲养7

d

后用

于实验。

1.3仪器

LK

-1000

A

高速中药粉碎机（新昌县城关红利数

控制备厂），旋转蒸发仪（南京金正科学仪器有限公

司），高速冷冻离心机（美国

Sigma

公司），美迪信血糖

仪（天津亿朋医疗器械有限公司）。

1.4方法

1.4.1不同苹取部位的制备将葛根用高速中药粉

碎机粉碎，过药典3号筛，得干燥葛根粉末。将其用

70%乙醇按8倍药材质量的溶剂量浸泡2

h

后，85

°C

水浴回流提取2次，每次2

h

，合并滤液，于45 °

C

下减

压浓缩为浸膏。

取上述浸膏适量，加蒸馏水调节生药浓度为1

g

•

ml

_1，依次用3倍体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯

萃取各3次，分别合并萃取液，于45 °

C

下减压浓缩，冷

冻干燥得葛根石油醚部位、葛根二氯甲烷部位、葛根乙

酸乙酯部位。将上述萃取后的剩余水溶液经

HP

20大

孔吸附树脂，用水洗至柱下液澄清，除去溶于水的寡糖

类、无机盐、黏液成分等，再用95%乙醇洗至柱下液澄

清，收集醇洗脱液于45 °

C

下减压浓缩，冷冻干燥得葛

根剩余部位，即葛根萃余物。

I. 4.2 2型糖尿病大鼠模型建立从适应性喂养7

d

后的80只大鼠中随机选择8只大鼠作为对照组，其余

作为糖尿病造模动物。正常组大鼠用正常普通饲料喂

养。模型组用高糖高脂饲料（含10%猪油、20%蔗糖、

1%胆酸盐、2. 5%胆固醇、66.5%普通饲料）喂养，饲养

1个月后禁食12

h

，腹腔注射

STZ

溶液(30

mg

•

kg

_1)

造模;高脂高糖饲料继续饲养1周，禁食12

h

,眼眶后

静脉丛取血测定大鼠空腹血糖（

FBG

)水平，以

FBG

為

II. 1

mmol

.

L

_1为2型糖尿病大鼠造模成功[9]。

1.4.3给药方式将2型糖尿病模型大鼠随机分为

模型组、盐酸二甲双胍组（〇. 11

g

•

kg

—1)及葛根的乙

后禁食6

h

,采用尾静脉取血检测各组大鼠

FBG

水平。

1.4.6 大鼠

HbAlc

和

FINS

水平测定糖尿病大鼠于

末次给药后禁食12

h

,眼眶后静脉丛取血于抗凝剂处

理的离心管中，

HbAlc

水平按试剂盒说明测定;取上述

全血经高速冷冻离心机离心得血清，

FINS

水平则采用

放射免疫法测定，计算稳态胰岛素抵抗指数（

HOMA

-

IR

)和胰岛敏感指数（

ISI

)。

HOMA-IR

=

FBG

x

FINS

/

22.5

;ISI

=

ln

[

l

/(

FBG

x

FINS

)]。

1.4.7血清脂肪代谢指标的测定取全血经高速冷

冻离心机离心得血清，取血清采用聚乙烯硫酸沉淀法

测定

LDL

-

C

水平，直接法测定

HDL

-

C

水平，酶偶联比

色法测定

TG

和

TC

水平，并测定血清中的

FFA

含量，

所有测定指标的操作均按试剂盒说明书进行。

1.5统计学处理

采用

SPSS

19. 0统计软件对数据进行统计分析，

实验数据以表示，采用

t

检验，组间差异分析采

用单因素

ANOVA

。

2 结果

2.1

—般生理状况观察

对照组大鼠饮水和进食均比较正常，反应灵敏，皮

毛有亮泽，体重增长;与对照组相比，模型组大鼠反应

迟钝、皮毛枯萎，摄食量和饮水量明显增加，且排尿增

多，体重下降。给药4周后，给药组大鼠情况较模型组

各方面情况均有所好转，饮水进食趋于正常，反应能力

明显增强，活动明显增加。

2.2大鼠

FBG

水平测定结果

模型组大鼠每周的

FBG

水平均较对照组高，两组

间差异具有统计学意义

(P

<〇. 〇1)

。

给药组与模型组

比较，给药1周后，盐酸二甲双胍组、二氯甲烷部位及

萃余部位组大鼠的

FBG

水平显著降低

（P

< 0. 01)，而

葛根乙酸乙酯部位和石油醚部位组则没有表现出血糖

降低;在给药2 ~ 4周后，盐酸二甲双胍组、葛根二氯甲

烷部位和萃余部位组大鼠的

FBG

水平均显著降低

(

P

<0.01)，且乙酸乙酯部位组在给药2周后的

FBG

李亚蓉，等.葛根不同苹取部位对链脲佐菌素致2型糖尿病大鼠糖脂代谢影响的研究

水平较模型组也显著降低

（P

<0.01)，而石油醚部位

组则跟给药1周的情况一样，没有表现出血糖降低。

提示葛根的萃余部位、乙酸乙酯部位和二氯甲烷部位

表1

• 359 •

均能明显降低糖尿病大鼠空腹血糖，且效果从弱到强

为葛根乙酸乙酯部位 < 葛根萃余部位 < 葛根二氯甲烷

部位。具体见表1。

葛根不同萃取部位对糖尿病大鼠

FBG

水平的影响(元±

s，ra

=8)

组另

IJ

对照组

模型组

剂量

/

FBG/mmol • L_1

给药前

给药

1

周

给药

2

周给药

3

周

给药

4

周

g * kg"1

-

-

0.11

1.58

1.58

1.58

1.58

4.37 ±0.55

21.03 ±1.88

20.47 ±2.05

22.71 ±1.98

23.97 ±2.52

21.14±1.95

20.88 ±1.84

0.01

4.56 ±0.73

20.65 ±2.42a

9.81 ±2.76b

20.32 ±1.92

9.28 ±1.76b

19.97 ±1.56

15.98 ±3.02b

3.78 ±0.61

21. 19 ±1.29a

7.33 ±0.78b

21.52 ±2.02

9.03 ±1.72b

18.02 ±2.23b

13.02 ±2.78b

3.57 ±0.59

19.98 ±2.07a

5.34 ±0.54b

23. 30 ±1.87

8.54 ±0.62b

18.01 ±3.54b

10. 13 ±3. 16b

3.61 ±0.62

21.35 ±2. 13a

4.93 ±0.61b

20.64 ±3.32

7.71 ±0.48b

17.37 ±3.01b

10.25 ±2.94b

盐酸二甲双胍组

石油醚部位组

二氯甲烷部位组

乙酸乙酯部位组

萃余部位组

a

与对照组比较，

P<

〇

.

〇

1;b

与模型组比较，

P<

2.3对糖尿病大鼠

HbAlc

和

FINS

水平的影响

给药组与模型组比较，盐酸二甲双胍、葛根萃余部

位、葛根乙酸乙酯部位、葛根二氯甲烷部位对

HbAlc

有明显的改善作用

（P

<〇.〇1);盐酸二甲双胍、葛根萃

余部位和葛根二氯甲烷部位对

FINS

有明显的改善作

用

（P

<0.01);盐酸二甲双胍、葛根萃余部位、葛根乙

表2

酸乙酯部位、葛根二氯甲烷部位可显著改善

HOMA-IR

(P

<0.01);盐酸二甲双胍、葛根萃余部位和葛根二氯

甲烷部位均可改善

ISI

(P

< 0. 05、0. 01)。结果提示，葛

根二氯甲烧部位、葛根乙酸乙酯部位及其萃余部位具有

降低胰岛素抵抗、增加胰岛素敏感性作用，且葛根二氯

甲烷部位和萃余部位效果相对最好。结果见表2。

葛根不同萃取部位对糖尿病大鼠

HbAlc

和

FINS

的影响(元±

s，ra

= 8)

组另

IJ

对照组

模型组

盐酸二甲双胍组

石油醚部位组

二氯甲烷部位组

乙酸乙酯部位组

萃余部位组

剂量

/g • kg-1

HbAlc/%

4.43 ±0.72

8.54±2.18a

4.67 ±0.68b

8.43 ±2.32

5.59 ±1.34b

7.07 ±1.83b

6.55 ±0.98b

—

—

0.11

1.58

1.58

1.58

1.58

FINS/mU • L1

13.98 ±1.21

18.27 ±2.53a

14.95 ±0.97b

18.16 ±1.26

15.54 ±0.78b

18.31 ±1. 19

16.21 ±1.04b

HOMA-IR

2.24 ±0.51

17.34±2.15a

3.28 ±0.62b

16.65 ±1.94

5.33 ±0. 83b

14. 15 ±1.56b

7.40 ±1.02b

ISI

-3.92 ±0.31

-5.97 ±0.44a

-4.31 ±0.25b

-5.93 ±0.37

-4.79 ±0.29b

-5.78 ±0.43°

-5. 11 ±0.41b

a

与对照组比较

，P <

〇

.

〇

1 ;b

与模型组比较

，P <0.01 ;c

与模型组比较

，P <0.05

2.4 葛根不同萃取部位对糖尿病大鼠血脂水平的

影响

模型组大鼠

tg

、

tc

、

ldl

-

c

水平均较对照组显著升

高(

P

<0.01)，而

HDL

-

C

、

FFA

水平则差异无统计学意

义。与模型组相比，盐酸二甲双胍组及葛根二氯甲烷部

位组大鼠

TG

、

TC

、

LDL

-

C

及

FFA

水平显著降低

（P

<

0.01或

P

<0.05)，而乙酸乙酯部位组及萃余部位组大鼠

仅有

tg

、

tc

、

ldl

-

c

水平显著降低

（P

<0.01或

P

<

〇.05)，且萃余部位组的降低效果低于乙酸乙酯部位组。

结果显示，葛根萃余部位、葛根乙酸乙酯部位和葛根二

氯甲烷部位均能够改善糖尿病大鼠的血脂水平，且效果

萃余部位 < 乙酸乙酯部位 < 二氯甲烷部位。见表3。

• 360 •

表

3

东南大学学报（医学版）2017年6月，36(3)

葛根不同萃取部位对糖尿病大鼠

TG

、

TC

、

HDL-C

、

LDL-C

、

FFA

水平的影响（元

±S

，

ra=8)

组另

IJ

对照组

模型组

剂量

/g • kg-1

-

-

0.11

1.58

1.58

1.58

1.58

TG

0.48 ±0. 13

1.64 ±0.71a

0.51 ±0.22b

1.59 ±0.63

0.49 ±0.31b

0.88 ±0.24b

1.41 ±0.27°

TC

0.97 ±0.22

5.75 ±1.47a

1.34 ±0. 30b

5.66 ±1.23

3.58 ±0. 87b

4.36 ±0.65b

5.31 ±0.61c

HDL-C

1.02 ±0.31

0.99 ±0.25

0.97 ±0.19

1.01 ±0.34

0.96 ±0.21

0.95 ±0.18

1.01 ±0.28

LDL-C

0.31 ±0.19

2.35 ±0.84a

0.37 ±0. llb

2.37 ±1.04

0. 35 ±0.21b

1.45 ±0.27b

2.02 ±0.42c

mmol • L1

FFA

0.61 ±0.23

0.65 ±0.27

0.54 ±0. 15c

0.66 ±0. 19

0.53 ±0. 12c

0.63 ±0.20

0.66 ±0.27

盐酸二甲双胍组

石油醚部位组

二氯甲烷部位组

乙酸乙酯部位组

萃余部位组

a

与对照组比较，

P<

〇

.

〇

l;b

与模型组比较，

P<0.01;C

与模型组比较，

P<0.05;

3

讨

论

[2]

顾观光（清）.神农本草经

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141-142.

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,2007:

目前市场上的化学降糖药作用强，起效快，但不良

反应较多，累及器官或全身各大系统，如出现过敏性休

克、低血糖性昏迷、室性早搏、全身剥脱性皮炎甚至死

亡[1°];而中药作用较为温和，且一般无不良反应或者

不良反应较轻，这能够为糖尿病患者提供更多的治疗

选择，同时为临床上使用安全有效的降血糖药物提供

了广阔的开发前景。

本实验为探索葛根降血糖的主要有效部位，研究

了葛根的萃余部位、乙酸乙酯部位、二氯甲烷部位和石

油醚部位对2型糖尿病大鼠模型的血糖、血脂代谢水

平及胰岛素抵抗及敏感性的作用，并将各萃取部位的

药效与盐酸二甲双胍进行了比较。结果显示，糖尿病

大鼠经过4周的给药治疗后，葛根二氯甲烷部位能够

明显降低其

FBG

、

HbAlc

、

FINS

、

HOMA

-

IR

、

TG

、

TC

、

LDL

-

C

、

FFA

水平，升高

ISI

,而乙酸乙酯部位和萃余部

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位虽同样也具有改善上述糖脂指标的作用，但效果均

低于二氯甲烷部位。此结果提示葛根的二氯甲烷部位

可能是葛根降血糖的主要有效部位，其药效部位中的

成分分析鉴定有待今后进一步的深入研究。本研究结

果为葛根降血糖新药的开发及后续临床合理用药提供

了参考。

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