2024年4月11日发(作者：)

Southern blot基本概述

一、目的

学习Southern blot技术及其应用

二、概述

1975年rn发明了将DNA切开，电泳分离，再变性，印迹到硝酸纤维（NC）

滤膜上，用探针进行杂交，检测DNA的方法。自显影或显色用于DNA分析。以

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P标记

放射性探针为例，放射自显影观察结果。

互补的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的

过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的，可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的

靶序列检测。杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因

组DNA，也可以是细胞总DNA 或总RNA。根据使用的方法被检测的核酸可以是提纯的，

也可以在细胞内杂交, 即细胞原位杂交。分子杂交是通过各种方法将核酸分子固定在固相

支持物上，然后用放射性或非放射性标记的探针与被固定的模板杂交，经显影或现色后检

测出目的DNA 或RNA 分子所处的位置。根据被测定的对象，分子杂交基本可分为以下

几大类： Southern 杂交、Northern 杂交、点杂交、缝隙及原位杂交。核酸分子杂交具

有很高的灵敏度和高度的特异性，因而该技术在分子生物学领域中已广泛地使用于克隆基

因的筛选、酶切图谱的制作、基因组中特定基因序列的定性、定量检测和疾病的诊断等方

面。因而它不仅在分子生物学领域中具有广泛地应用，而且在临床诊断上的应用也日趋增

多。Southern 杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA 片段中是否存在与探针同

源的序列。本实验包括基因组DNA限制性内切酶切，DNA电泳及转膜，杂交及检测三部

分。

三、基因组DNA限制性内切酶酶切

（一）、试剂及材料

1. EcoRl内切酶及反应buffer

2. 基因组DNA或PCR产物等样品

3. 去离子水

4. eppendorf管及Tip头

5. PCR仪

6. 标记笔、无粉手套等

（二）、操作步骤：

1. 设置50ul反应体系，在200ulEP管中加入：

10ug基因组DNA x ul

去离子水 49-xul