2024年4月11日发(作者：)

化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其发光机理是：反应体系中的某些

物质分子，如反应物、中间体或者荧光物质吸收了反应释放的能量而由基态跃迁到激发态，

当中间体由激发态回到基态时会释放等能级的光子，对光子进行测定而实现定量分析。

化学发光免疫分析方法是将化学发光与免疫反应相结合的产物，因化学发光具有荧光

的特异性，但与荧光产生需要激发光不同，化学发光由化学反应产生光强度，并不需要激

发光，从而避免了荧光分析中激发光杂散光的影响。化学发光免疫分析包含了免疫化学反

应和化学发光反应两个部分。免疫分析系统是将化学发光物质或酶标记在抗原或抗体上，

经过抗原与抗体特异性反应形成抗原－抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应

结束后，加入氧化剂或酶的发光底物，化学发光物质经氧化剂的氧化后，形成一个处于激

发态的中间体，会发射光子释放能量以回到稳定的基态，发光强度可以利用发光信号测量

仪器进行检测。待测物质浓度因为与发光强度成一定的关系而实现检测目的。

一、化学发光免疫分析方法的类别

化学发光免疫分析法根据标记物的不同可分为3 大类， 即化学发光免疫分析、 化学

发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析法。

（一）化学发光免疫分析 化学发光免疫分析是用化学发光剂直接标记抗体或抗原的一

类免疫测定方法。目前常见的标记物主要为鲁米诺类和吖啶酯类化学发光剂。

1. 鲁米诺类标记的化学发光免疫分析 。

鲁米诺类物质的发光为氧化反应发光。在碱性溶液中，鲁米诺可被许多氧化剂氧化发

光，其中H2O2最为常用。因发光反应速度较慢，需添加某些酶类或无机催化剂。酶类主

要是辣根过氧化物酶（HRP），无机类包括O3、卤素及Fe3+、 Cu2+、 Co2+和它们的

配合物。鲁米诺在碱性溶液下可在催化剂作用下，被H2O2等氧化剂氧化成3－氨基邻苯

二酸的激发态中间体，当其回到基态时发出光子。鲁米诺的发光光子产率约为0.01，最大

发射波长为425 nm。

2. 吖啶酯类标记的化学发光免疫分析

吖啶酯用于化学发光免疫分析方法（ChemiluminescentImmunoassay， CLIA）由

于 热 稳 定 性 不 是 很 好，Klee 等研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物 。 在含有

H2O2的碱性条件下，吖啶酯类化合物能生成一个有张力的不稳定的二氧乙烷，此二氧乙

烷分解为CO2和电子激发态的N－甲基吖啶酮， 当其回到基态时发出一最大波长为430

nm 的光子。 吖啶酯类化合物量子产率很高，可达0.05。吖啶酯作为标记物用于免疫分

析，发光体系简单、快速，不需要加入催化剂，且标记效率高，本底低。吖啶酯或吖啶磺

酰胺类化合物应用于CLIA，通常采用HNO3+H2O2和NaOH 作为发光启动试剂， 有些

在发光启动试剂中加入Triton X－100， CTAC， Tween－20等表面活性剂以增强发光。

（二）化学发光酶免疫分析

化学发光酶免疫分 析（ Chemiluminescent Enzyme Immunoassay,CLEIA）是以酶

标记生物活性物质进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂

作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶（HRP）

和碱性磷酸酶（ALP），它们有各自的发光底物。HRP 最常用发光底物是鲁米诺及其衍生

物 。在CLEIA 中， 使用过氧化物酶标记抗体， 进行免疫反应后，利用鲁米诺作为发光

底物，在过氧化物酶和起动发光试剂（NaOH和H2O2）作用下鲁米诺发光，酶免疫反应

物中酶的浓度决定了化学发光的强度。此传统的化学发光体系（HRP－H2O2－lumi-nol）