2024年3月20日发(作者：)

亿学与生物Ｚ程２０１２，Ｖｏ１．２９　Ｎｏ．８　

Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—５４２５．２０１２．０８．００８　

雷莫拉宁的分离纯化工艺研究　

朱秀良，王海燕。李宁。林毅。李晓露，张雪霞，蒋沁　

（微生物药物国家工程研究中心河北省工业微生物代谢工程技术研究中心，　

华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北石家庄０５００１５）　

摘要：以聚酰胺树脂为分离介质，研究了从发酵液中分离纯化雷莫拉宁的工艺过程，对吸附及解吸条件进行了优　

化。结果表明，在雷莫拉宁浸提液浓度为１６００￣２０００　ｇ・ｍＬ＿。、吸附流速为１．０　ＢＶ・ｈ－　、乙醇作洗脱剂（先用３０　或　

５Ｏ　乙醇洗脱，再用７Ｏ　乙醇洗脱）的条件下，可得到总收率超过８Ｏ　、纯度大于９５　的雷莫拉宁，该方法简单易行、安　

全性高，适于工业化生产。　

关键词：雷莫拉宁；聚酰胺树脂；分离纯化；糖肽类抗生素　

中图分类号：ＴＱ　４６５　ＴＱ　９２７　Ｒ　９７８．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—５４２５（２０１２）０８－－００３５－－０３　

雷莫拉宁（Ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ，Ａ一１６６８６，ＭＤＬ６２）是一种　有限公司；大孔树脂ＨＺ８０１，上海华震科技有限公司；　

新型的糖肽类抗生素，由意大利Ｃａｖａｌｌｅｒｉ等【１］在游动　聚酰胺树脂，上海沪峰生物科技有限公司；珍珠岩助滤　

放线菌（Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ　ｓｐ．）中首次分离得到，主要抑制　

剂，廊坊三新珍珠岩制品有限公司；去离子水，自制；乙　

革兰氏阳性菌的生长，其纯品是由Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ１　、　

腈（色谱纯），美国Ｍｅｒｃｋ公司；工业乙醇，沧州兴隆化　

Ａ２　、Ａ３　、Ｒａｍｏｐｌａｎｏｓｅ等７个组分组成的混合物，其　工有限公司；其它试剂均为国产分析纯。　

中Ａ２为主要成分，占７５　左右Ｌ２］。　高效液相色谱仪（９９６检测器，５１５泵），Ｗａｔｅｒｓ公　

雷莫拉宁抑制细胞壁上肽聚糖的生物合成，其抑　司；Ｌｏｂｏｒａｔａ　４０００型旋转蒸发器，Ｈｅｉｄｏｌｐｈ公司；　

菌机制与万古霉素及替考拉宁的抑菌机制不同；在体　

ＴＧＬ一１６Ｇ型高速离心机，上海安亭科学仪器厂。　

内、体外的试验中，雷莫拉宁均表现出良好的广谱抗菌　

１．２　ＨＰＬＣ检测条件　

活性，大部分病原菌（革兰氏阳性菌）对雷莫拉宁敏感　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｅｃｌｉｐｅ　ＸＤＢ　Ｃ８（４．６　ｍｍ×１５０　

性均高于万古霉素和替考拉宁；雷莫拉宁的细胞毒性　

ｍｍ，５　ｍ）；流动相：乙腈一酸水（０．１　Ｈ３ＰＯ４）（８０　

要比其它糖肽类抗生素小且无明显不良反应及肾毒　：２０，体积比）；流速：１．０　ｍＬ・ｍｉｎ一　；检测波长：２５４　

性［２］。因此，雷莫拉宁用于治疗革兰氏阳性菌引起的　

ｎｍ；进样量：１０　Ｌ。　

感染性疾病前景较好。　

１．３雷莫拉宁浸提液的制备　

目前，关于雷莫拉宁的分离纯化研究较少，且已有　在发酵液中加入５　９，６～７　珍珠岩助滤剂，搅拌３Ｏ　

的制备工艺繁琐、成本高、所得产品纯度低【３“］。作者　

ｍｉｎ，真空抽滤，用水洗涤得菌丝体；将菌丝体用适量　

在此根据雷莫拉宁化学结构中羟基多的特点，以聚酰　８Ｏ　乙醇一酸水（ｐＨ值３．Ｏ～３．５）搅拌下浸泡２　ｈ，真　

胺树脂为分离介质，从发酵液中分离纯化雷莫拉宁，并　空抽滤，得雷莫拉宁浸提液。　

对吸附及解吸条件进行了优化，以期得到高纯度雷莫　

１．４树脂的筛选　

拉宁。　

根据雷莫拉宁弱极性及多羟基的特性，分别量取　

１　实验　

ＬＸ－２０００、ＬＸ一１８、ＨＺ８０１和聚酰胺等４种弱极性吸附　

树脂２０　ｍＬ于４根适当的玻璃柱中，从柱顶注入雷莫　

１．１材料、试剂与仪器　

拉宁浸提液至有目标产物从树脂柱上流出时，停止上　

雷莫拉宁发酵液，华药集团新药公司；雷莫拉宁标　样。以树脂对雷莫拉宁的绝对吸附量为指标，并参照　

准品，自制；大孔树脂ＬＸ一２０００、ＬＸ一１８，西安蓝晓科技　解吸收率进行筛选。　

基金项目：国家“微生物药物技术创新与新药创制产学研联盟”科技专项（２ＯｌＯＺＸ０９４Ｏ１）　

收稿日期：２Ｏ１２一Ｏ３—２９　

作者简介：朱秀￣（１９６２－－），男，河北藁城人，高级工程师，主要从事药物研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉｕｌｉａｎｇ

＿

ｚｈｕ＠１６３．ｃｏｒｎ。　

１．５吸附条件的考察　

１．５．１雷莫拉宁浸提液浓度的选择　

将雷莫拉宁浸提液用ＮａＯＨ溶液调ｐＨ值为６．５　

～

７．５，减压浓缩除去乙醇，浓缩液过滤除去不溶物，再　

加去离子水稀释成不同浓度（　ｇ・ｍＬ　）：４００、８００、　

１２００、１６００、２０００、２４００、２８００、３２００，分别上聚酰胺树脂　

柱（树脂装量２Ｏ　ｍＬ，流速１．０　ＢＶ・ｈ　），ＨＰＬＣ在线　

检测，当有目标产物流出时，停止上样，计算吸附量，确　

定最佳雷莫拉宁浸提液浓度。　

１．５．２吸附流速的选择　

选择流速（ＢＶ・ｈ　）分别为０．５、１．０、１．５、２．０、　

３．０，每１０　ｍＬ流出液为一个样品，测其浓度，计算泄　

漏率，确定最佳吸附流速。　

１．６解吸条件的考察　

取２００　ｍＬ处理好的聚酰胺树脂装柱，将１０００　

ｍＬ　１６００　ｐ－ｇ・ｍＬ　雷莫拉宁浸提液从柱顶注入，控制　

流速为１．０　ＢＶ・ｈ～。上样完毕，依次采用体积分数　

为３Ｏ％、５０　、６０　、７Ｏ％、８Ｏ　９／５的乙醇解吸，解吸流速　

为０．５　ＢＶ・ｈ一

＿－１［Ⅲ．　ｌ／棚莲昏　

０　９　８　７　６

　。分段收集解吸液，ＨＰＬＣ在线检测，

　５　４　３　２　１　

　

计算不同体积分数乙醇的解吸收率，并结合解吸液质　

量确定最佳解吸条件。　

１．７　结晶　

４５℃下，将解吸液减压浓缩至２０　ｍｇ・ｍＬ　左　

右，搅拌下缓缓加入８～１０　ＢＶ丙酮，室温静置４　ｈ，抽　

滤，丙酮洗涤，真空干燥，得到雷莫拉宁白色结晶粉末。　

２结果与讨论　

２．１树脂的筛选（表１）　

表１　不同类型树脂对雷莫拉宁的吸附量及解吸收率　

Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｙｉｅｌｄ　

ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｒ￣ｉｎｓ　ｆｏｒ　ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ　

由表１可知，聚酰胺树脂对雷莫拉宁的吸附量和　

解吸收率明显大于其它树脂，可以达到对雷莫拉宁的　

富集作用，而且聚酰胺树脂的解吸液颜色较浅。故选　

用聚酰胺吸附树脂进行后续实验。　

２．２吸附条件的优化　

２．２．１雷莫拉宁浸提液浓度对树脂吸附量的影响（图１）　

由图１可见，在相同的流速下，雷莫拉宁浸提液浓　

度越低，吸附量越高，但生产周期越长；雷莫拉宁浸提　

液浓度过高，又不利于树脂吸附，吸附量较低。因此，　

朱秀良等：雷莫拉宁的分离纯化工艺研究／２０ｌ２年囊８期　

选择雷莫拉宁浸提液浓度为１６００￣２０００　ｔＬｇ・ｍＬ＿。。　

２．２．２　吸附流速对树脂吸附量的影响（图２）　

４５　

４Ｏ　

３５　

３０　

篓２

察２０　

５　

ｌ５　

１０　

５　

０　

１０　２０　３０　４０　５０　６０　７０　８０　９０　１００　ｌ１０　１２０　

流出液体积／ｍＥ　

图２吸附流速对聚酰胺树脂吸附量的影响　

Ｆｉｇ．２　Ｅｆ￣ｃｔ　ｏｆ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｎ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃａｐａｃｉｔｙ　

ｏｆ　ｐｏｌｙａｍｉｄｅ　ｒｅｓｉｎ　

由图２可见，吸附流速大于１．０　ＢＶ・ｈ一　后，泄漏　

率明显升高；而吸附流速为０．５　ＢＶ・ｈ　与１．０　ＢＶ・　

ｈ～　时的泄漏率相差不大。因此，选择吸附流速为１．０　ＢＶ　

・

ｈ～。　

２．３解吸条件的优化　

用不同体积分数的乙醇洗脱树脂，结果见表２。　

表２　不同体积分数乙醇的解吸收率　

Ｔａｂ．２　Ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｙｉｅｌｄ　ａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｖｏｌｕｍｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｅｔｈａｎｏｌ　

３０　６００　０　

——　

０　

５Ｏ　６００　

２７　１５．０　

０．３　

６０　６００　

１ｌ１Ｏ　

８５．５　

３５．６　

７Ｏ　６００　１７３３　９２．６　６０．２　

８０　６００　

４０．２　７９．７　１．２　

由表２可知，当乙醇体积分数小于５Ｏ％时，洗脱　

朱秀良等：霄真拉宁的分离纯化工艺研究［２０１２年囊８啊　

的是一些色素和杂质；乙醇体积分数为６Ｏ　时，洗脱　将解吸液减压浓缩至２Ｏ　ｍｇ・ｍＬ　左右，加人８　

不完全，解吸收率仅３５．６　，这是由于乙醇体积分数　

～

１Ｏ　ＢＶ的丙酮，静置４　ｈ后，抽滤，用丙酮洗涤，真空　

低，树脂孔径未能充分溶胀，不利于雷莫拉宁在乙醇中　干燥，得到纯度大于９５　的雷莫拉宁晶粉。　

的溶解；乙醇体积分数为７Ｏ　时的解吸液浓度最高，　

２．４工艺验证　

且杂质较少，纯度也相对较高，说明７Ｏ　乙醇有利于　在上述最佳分离纯化工艺条件（以聚酰胺树脂作　

目标产物的洗脱；乙醇体积分数为８Ｏ　时，解吸液浓　

为分离介质，雷莫拉宁浸提液浓度１６００～２０００　ｇ・　

度很低，纯度也不高，解吸收率仅１．２　，说明目标产　

ｍＬ＿。，吸附流速１．０　ＢＶ・ｈ＿。，乙醇作洗脱剂）下，连　

物已被洗脱完全。故，确定洗脱条件为：先用３０　或　

续进行３批验证实验，结果见表３。　

５Ｏ　乙醇洗去极性大的杂质，再用７Ｏ　乙醇洗脱。　

表３　验证实验结果　

Ｔａｂ．３　

Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　

由表３可知，在最佳分离纯化工艺条件下，总收率　

参考文献：　

均超过８Ｏ　、产品纯度大于９５　。　

Ｉ－１］Ｃａｖａｌｌｅｒｉ　Ｂ。Ｐａｇａｎｉ　Ｈ，Ｖｏｌｐｅ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ａ－１６６８６。ａ　ｎｅｗ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　

ｆｒｏｍ　Ａｃｔｉｎｏｐｌａｎｅｓ．Ｉ．Ｆｅｒｍｅｎｔｉｏｎ．ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｅｌｉｍ！ｎａｒｙ　ｐｈｙｓｉ—　

３　结论　

ｃｏ－ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｎｔｉｂｉｏｔ，１９８４，３７（４）ｌ３０９—３１７．　

［２］郭月玲，赵子弟．倪慧敏，等．新型糖肽类抗生索雷莫拉宁研究进　

采用聚酰胺吸附树脂分离纯化发酵液中的雷莫　

展口］．河北化工，２０１１，３４（８）：２８—３１．　

拉宁，在雷莫拉宁浸提液浓度为１６００～２０００　ｇ・　

［３］李继安，徐斌．一种雷奠拉宁的纯化方法［Ｐ］．ＣＮ　１０１　０２４　６６２，　

ｍＬ～、吸附流速为１．０　ＢＶ・ｈ＿。、乙醇作洗脱剂（先　

２００７・０８—２９．　

用３Ｏ　或５Ｏ　乙醇洗脱，再用７Ｏ　乙醇洗脱）时，可　

Ｅ４］李继安，卢亮，张宏字．雷莫拉宁的分离方法［Ｐ］．ＣＮ　１０１　８３８　３１５Ａ，　

２０１０—０９－２２．　

得到高纯度雷莫拉宁，总收率超过８Ｏ　，纯度大于　

Ｉｓ］张春颖，周青．应用纳滤浓缩纯化技术从发酵液中制取雷莫拉宁　

９５　９，６。该方法简单易行，收率稳定，安全性高，适合　

［Ｐ］．ＣＮ　１０２　０１０　４６２。２０１　Ｉ－０４—１３．　

工业化生产。　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ　

ＺＨＵ　Ｘｉｕ－ｌｉａｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｈａｉ‘ｙａｈ，ＬＩ　Ｎｉｎｇ，ＬＩＮ　Ｙｉ，ＬＩ　Ｘｉａｏ－ｌｕ，ＺＨＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｘｉａ，ＪＩＡＮＧ　Ｑｉｎ　

（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｈｅｂｅｉ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　

Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｃｏｍｐａｎｙ　

ｏｆ　ＮＣＰＣ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００１５，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｓｉｎｇ　ｐｏｌｙａｍｉｄｅ　ｒｅｓｉｎ　ａｓ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉ　ｕｍ，ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｍｏ—　

ｐｌａｎｉｎ　ｆｒｏｍ　ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　ｂｒｏｔｈ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｃａｐａｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｙｉｅｌｄ，ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　

ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ　ｗｅｒｅ　ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　

ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　８０　９，６，ｔｈｅ　ｐｕｒｉｔｙ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　９５　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：ｔｈｅ　ｒａｍｏｐｌａ—　

ｎｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　１６００￣２０００　ｇ・ｍＬ一　，ｔｈｅ　ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｆｌｏｗ’ｒａｔｅ　ｗａｓ　１．０　ＢＶ・ｈ一　，ｕｓｉｎｇ　ｅｔｈａｎｏｌ　

（ｆｉｒｓｔ　３０　Ａ０　ｏｒ　５０　，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　７０％）ａｓ　ｅｌｕｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｆｏｒ　ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　ｐｒｏｄＵＣｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｖ，　

ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ｓａｆｅｔｙ．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｒａｍｏｐｌａｎｉｎ；ｐｏｌｙａｍｉｄｅ　ｒｅｓｉｎ；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ