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舌鳞状细胞癌组织中CD44和CD133的表达及临床意义

栾可峰;李新新;孙学辉;范欣;巩佃霞;胡温庭

【摘 要】目的 探讨舌鳞状细胞癌癌组织中肿瘤干细胞标志物CD44和CD133的

表达与临床病理特征及预后的关系.方法 应用免疫组化法研究67例舌鳞状细胞癌

癌组织中CD44和CD133的表达状况.结果 CD44和CD133在舌鳞状细胞癌患者

中的阳性表达率分别为58.21％ (39/67)和65.67％(44/67);CD44、CD133的表

达与患者年龄、性别无关(P＞0.05),但与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移相

关(P＜0.05);单因素分析显示:CD44的阳性表达和CD133的阳性表达均与患者5

年生存率存在相关性(P＜0.05),Cox多因素分析显示:组织分化程度、CD44的阳性

表达及CD133的阳性表达是患者生存的独立预后影响因素(P＜0.05).结论 CD44、

CD133在舌鳞状细胞癌中的表达与患者的恶性生物学行为有关,可作为预后评价的

参考标准,对临床诊疗具有重要的指导意义.

【期刊名称】《湖北民族学院学报（医学版）》

【年(卷),期】2016(033)003

【总页数】4页(P17-20)

【关键词】舌鳞状细胞癌;CD44;CD133;临床病理特征;预后

【作 者】栾可峰;李新新;孙学辉;范欣;巩佃霞;胡温庭

【作者单位】潍坊医学院 山东潍坊261000;潍坊医学院 山东潍坊261000;潍坊医

学院 山东潍坊261000;潍坊医学院 山东潍坊261000;潍坊医学院 山东潍坊

261000;潍坊医学院 山东潍坊261000

【正文语种】中 文

【中图分类】R739.8

在口腔颌面恶性肿瘤中，舌鳞状细胞癌是发病率最高的恶性肿瘤之一，发展速度快，

恶性程度高，并常累及舌肌，严重影响患者的饮食及语言等基本生活功能，患者早

期即可发生颈淋巴结转移，影响生存和预后[1]。研究发现，舌癌的发病率逐年增

加，并有年轻化趋势[2]，Popovtzer等[3]研究发现，45岁以下舌癌患者所占比

例达30%，因此提高舌癌的早期诊断及治疗技术至关重要。肿瘤干细胞(cancer

stem cells, CSCs)理论的提出给人类进一步认识肿瘤的发生、复发、转移及耐药带

来新的希望，CD44和CD133是目前具有重要临床意义的肿瘤干细胞因子，但是

在舌鳞状细胞癌中的研究相对较少[4-7]，本研究采用免疫组化的方法研究舌鳞状

细胞癌中CD44和CD133的表达情况，并进一步研究两者的表达与患者恶性生物

学行为及预后的关系，现报道如下。

1.1 一般资料 收集2008年06月01日—2011年03月01日在潍坊医学院附

属医院就诊的初治行手术治疗的67例舌鳞状细胞癌患者，术前所有患者均未接受

任何抗肿瘤治疗，术后均经病理组织学确诊为舌鳞状细胞癌。患者的病理分期依美

国癌症联合委员会(AJCC)胃癌TNM分期(2010年第七版)：①组织分化程度：高

分化19例，中分化22例，低分化26例；②临床分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期18例，

Ⅲ期14例，Ⅳ期16例；③有淋巴结转移的41例，无淋巴结转移的26例。每例

手术标本在离体后5 min内，立即在癌灶中心非坏死部分取实验组织，将组织块

置于福尔马林液中固定,石蜡包埋切片。

1.2 主要试剂 CD44与CD133单克隆抗体分别购自eBioscience和Milrenyi

Biotec公司。

1.3 免疫组织化学染色 ①把切片置于60℃(与蜡块熔点相等)的温箱中烤30

min；②二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水：二甲苯Ⅰ(5～10 min)⟹二甲苯Ⅱ(5～10

min)⟹100%酒精Ⅰ(3～5 min)⟹100%酒精Ⅱ(3～5 min)⟹95%酒精Ⅰ(1～3

min)⟹95%酒精Ⅱ(1～3 min)⟹80%酒精(1～3 min)⟹70%酒精(1～3 min)⟹蒸馏水

冲洗3次，3 min/次；③抗原修复：将抗原修复液(含EDTA)稀释50倍并置于大

器皿中水浴(95～98℃持续15～20 min，pH 6.0)，组织切片置于修复液中，让其

自然冷却至室温，蒸馏水冲洗，后PBS冲洗3次，3 min/次；④阻断内源性过氧

化物酶活性：3% H2O2 37℃避光孵育10～15 min，PBS冲洗3次，3 min/次；

⑤加CD44(或CD133)一抗，每张切片滴50 μL，平放于湿盒中，4℃冰箱过夜，

用PBS代替一抗作阴性对照；⑥37℃复温30 min，PBS冲洗3次，3 min/次；

⑦加50 μL A液(标记有辣根过氧化物酶和抗兔/鼠免疫球蛋白的多聚分子)37℃孵

育30 min；⑧孵育完毕， PBS缓冲液冲洗3次，3 min/次，加DAB工作液50

μL，避光显色，显微镜下控制显色时间，一般10～15 min；⑨DAB终止显色，

自来水充分冲洗；⑩苏木素复染，中性树胶封片。

1.4 免疫组织化学染色结果判定标准 CD44和CD133主要表达于细胞膜，在细

胞浆中少量表达，细胞膜被染成褐黄色、棕黄色和淡黄色的即可认为是阳性细胞，

在组织片子上随机选取4个高倍视野，每个视野观察500个细胞，计算阳性细胞

率，<10%为阴性，≥10%为阳性[8]。

1.5 统计学分析 应用SPSS 17.0统计学软件，率的比较采用χ2检验，相关性

分析采用Spearman检验，应用Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行单因素

分析，Cox回归模型进行多因素分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2.1 CD44与CD133在舌鳞癌组织中的表达 CD44与CD133主要表达于胞膜

上，在舌鳞癌组织中均可见阳性表达，阳性表达率分别为58.21%(39/67)和

65.67(44/67)。

2.2 CD44与CD133在舌鳞癌组织中的表达与临床病理因素的关系 在舌鳞癌组

织中，CD44、CD133的表达均与患者年龄、性别无关(P>0.05)，与患者肿瘤组

织分化程度、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)，组织分化程度越低、临床分

期越晚、存在淋巴结转移，CD44和CD133的阳性表达率越高，见表1,表2。

2.3 CD44与CD133阳性表达的关系 利用spear-man等级相关分析显示：认

为CD44表达与CD133表达不具有相关性(r=0.025，P=0.843)，见表3。

2.4 CD44与CD133阳性表达与患者生存状况的关系 单因素分析显示：CD44、

CD133阳性舌鳞癌患者的5年生存率明显低于CD44、CD133阴性的舌鳞癌患者

(P<0.05)，见图1，图2。Cox多因素分析显示：年龄、性别、淋巴结转移及临床

分期不是影响患者预后的独立因素，组织分化程度、CD44的阳性表达及CD133

的阳性表达是患者生存的独立预后影响因素，见表4。

肿瘤的耐药、复发及转移是目前肿瘤诊疗中面临的巨大困难，是对患者生存时间和

生活质量的严重威胁。近年来研究表明肿瘤组织中存在的具有自我更新、高增殖能

力及多向分化潜能的极少量细胞(即肿瘤干细胞)与肿瘤的耐药、复发、转移存在密

切关系[9]， Vermeulen L等[10]发现肿瘤进展与转移是肿瘤干细胞与局部微环境

相互作用的结果，随着研究的不断进展，逐渐发现几乎所有实体瘤中均存在肿瘤干

细胞[11-12]。

CD44是一种细胞表面粘附分子，是一种由胞外区、跨膜区及胞浆尾部组成的跨膜

分子，参与细胞间及细胞与细胞间质的粘附、粘连及转移。研究者最初在乳腺癌干

细胞的研究中发现CD44分子，Prince等[13]证实在口腔鳞状细胞癌中，CD44阳

性的细胞具有明显高于CD44阴性细胞的致瘤能力，将5 000个CD44阳性的口

腔鳞状细胞癌细胞植入小鼠体内即可成瘤，而多倍数的CD44阴性细胞仍无法成

瘤，证明了CD44阳性的细胞富集了肿瘤干细胞。CD133又称Prominin-1，其

编码基因在4号染色体(4p15)上，是一个由865个氨基酸组成的相对分子量为

117 000D的具有5次跨膜结构的单链糖蛋白，CD133表达在膜突出部，有专家

由此推断其可能是通过酪氨酸残基磷酸化作用而发挥级联效应的生长因子受体。目

前CD133的表达与舌鳞状细胞癌干细胞的关系研究还处在初级阶段，王开等[14]

在对人口腔鳞状细胞癌细胞株Tea-8113进行实验时发现，仅占很小一部分的

CD133阳性细胞比CD133阴性的细胞具有更强的体外增殖和分化能力，Zhang

等[15]在研究人口腔鳞状细胞癌细胞系及癌组织时也发现CD133阳性细胞比

CD133阴性细胞具有更强的侵袭力和转移能力，这些研究有力地推动了CD133

与舌癌研究的进展。

关于肿瘤干细胞标志物CD44、CD133与舌癌关系的研究在不断进展，本研究利

用免疫组织化学的方法探索67例舌癌患者癌组织中CD44、CD133的表达情况，

发现很大部分舌癌患者癌组织中存在CD44、CD133两种因子的表达，我们可以

考虑是否两种因子可以作为舌癌患者早期诊断的“肿瘤标志物”；在两者表达与临

床病理特征的关系的研究中发现，组织分化程度越低、临床分期越晚、存在淋巴结

转移，CD44和CD133的阳性表达率越高，说明两种因子的表达与患者的恶性生

物学行为存在密切关系，可作为舌癌患者恶性生物学行为的评价指标；并且CD44

和CD133阳性表达的患者5年生存率均明显低于CD44和CD133阴性表达的患

者，两者的表达与患者生存率存在关系，可以作为舌鳞状细胞癌患者预后的参考指

标。但是，应用Spearman分析发现，CD44与CD133的表达不存在相关性，但

是仍可以考虑将CD44和CD133作为舌鳞状细胞癌肿瘤干细胞的标志物，为探讨

舌癌的发病机制及舌癌鳞状的诊疗的进展提供依据。

综上所述，舌癌干细胞标志物CD44、CD133的表达与舌癌的恶性生物学行为及

预后密切相关，但目前研究仍处在初级阶段，需要我们继续验证CD44、CD133

对于舌癌的影响，并继续发掘其更深层次的作用，为舌癌的诊疗开拓更多的思路，

为治愈提供更广阔的前景。

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