2024年4月6日发(作者：小米应用商店安装)

1. itraq的原理是什么？

Itraq的检测可以做这样的比喻，蛋白被打成肽段后，被平均的铺在了一个有384个

孔的平板上，然后机器会从每个孔中选取浓度在前5名的蛋白进行鉴定和比对，所以，如

果假设每个一个样本中有100个蛋白，他们的浓度均为1%，那么得到的结果就是蛋白的

得分低，但是鉴定的蛋白数量会很多，可以达到90以上；如果一个样本中有100个蛋白，

有3个蛋白的含量分别为30、20、10、其他的97钟蛋白为剩下的50%，那么这三种蛋

白的得分高，但是鉴定出的蛋白数量会比较少，也许只有50或者60个。因为一些高丰度

的蛋白会大量分部在上述的小孔中，抑制了其他蛋白的检出效果。

2. iTRAQ技术区别与以往二维电泳技术，具有如下优势：

2.1灵敏度很高，检测限较低，可检测出低丰度蛋白；

2.2高通量：同时对4-8个样本进行分析，提高实验通量，可同时对多个时间点或不

同处理的蛋白质进行分析；

2.3分离能力强，分析范围广，iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行分离鉴定，包括

高分子量蛋白质、酸性蛋白和碱性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白；

2.4结果可靠：通过高度敏感性和精确性的串联质谱方法，不需要凝胶，即可获得相对

定性与定量分析结果；

2.5自动化程度高：液相与质谱连用，自动化操作，分析速度快，分离效果好。

由此可得，iTRAQ技术比二维电泳技术能发现更多数量和种类的蛋白，但在比较胞浆

蛋白及蛋白量的变化方面，二维电泳技术有一定长处，对iTRAQ的实验结果有互补作用。

3. LC/MS中蛋白处理是定量还是定性？

这是属于定量，需在蛋白定量后，各取相同量（50-100 ug）的蛋白（体积不大于25

ul，少于25 ul的用专用裂解液补至25 ul）进行还原化和烷基化。

4. LC/MS对需要检测的蛋白有量的要求吗？

有的，要求蛋白量最低50 ug，浓度最低要为5 ug/uL，否则同位素无法标记。

5. 数据分析中主要看哪些参数？

对于液质联用的数据分析，一般观察的参数为：Total Ion Score C.I. %（可信度）和

Tag-80/Tag-0（两样本的比值）。

6. 众多可信度数值中，主要选择哪些进行研究？

一般来说可信度在80%以上的均为可信程度非常高的。有些蛋白可信度在60%以上的

也可以作为参考数据。

7. 可信程度低于80%的数据有意义吗？

可信程度低于此值的，如果有感兴趣的蛋白可以通过ELISA、WB、Q-PCR、液态芯

片等技术手段进一步验证，毕竟LC/MS是研究蛋白组学的方法之一，如全面研究还是要综

合各种研究方法。