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方药•展令令料

DOI: 10. 12174/j. issn. 1004-6852. 2020. 11. 13

网络出版时间：2019-07-16 11: 39: 19

Western Journal, of Traditional Chinese Medicine,2020 Vol.33 No. 11

网络出版地址：http: //kns. cnki. net/kcms/detai 1/62. 1204. R. 20190716. 1139. 008. html

枳壳配方颗粒刳备工艺及质量砑光*

贺友安〃，胡辉钱全全2,刘源才13

1劲牌生物医药有限公司，湖北黄石435100; 2劲牌研究院；

3中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室

[摘要]目的：优化枳壳配方颗粒的制备方法，建立枳壳配方颗粒的质量标准。方法：以柚皮苷、新橙皮

苷的提取转移率为指标；以加水倍数、提取时间、提取次数为因素，设计正交试验优化枳壳配方颗粒的提取条

件并进行验证试验;采用薄层色谱法对枳壳配方颗粒中柚皮苷和新橙皮苷进行定性鉴别；采用高效液相色谱

法测定枳壳配方颗粒中柚皮苷、新橙皮苷的含量。结果:枳壳配方颗粒最佳提取工艺为饮片加10倍水，提取3

次，每次提取1 h;供试品薄层色谱在对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点；柚皮苷和新橙皮苷质量浓

度的线性范围分别为42. 823 8〜781. 181 2、45. 567 0〜729. 072 Omg/LG•均为0. 999 9)，精密度试验的RSD分别

为1. 05%、0. 64%(n=6),稳定性试验的RSD分别为1. 43%、1. 08%(n=6),重复性试验的RSD分别为0. 72%、0. 64%(n=6)，

平均加样回收率分别为96. 26%、97. 23%(RSD分别为0. 69%、0. 37%，p9); 3批样品中柚皮苷含量为93.614〜

99. 016 mg/g,新橙皮苷含量为75. 046〜78. 816 mg/g。结论:优化的提取工艺稳定，建立的枳壳配方颗粒质量标

准操作简单、快速、准确，可用于质量控制。

[关键词]枳壳；配方颗粒；工艺；质量;柚皮苷;新橙皮苷

[中图分类号]R284 [文献标识码]A [文章编号]1004-6852 (2020) 11-0048-05

Study on the Quality and Preparation of Zhiqiao Dispensing Granules

HE Youan1 2, HU Hui QIAN Quanquar{ LIU Yuancai1 3

1 Jing Brand Bio-medicine CO., LTD., Huangshi 435100, China;

2 Research Institute of Jing Brand;

3 Hubei Provincial Key Laboratory for Quality and Safety of Traditional Chinese Medicine Health Food

Abstract

Objective: To optimize the preparation of Zhiqiao dispensing granules and establish quality stan­

dard of Zhiqiao dispensing granules. Methods: By taking the extraction and transfer rate as the indexes, water

amounts, extraction time and extracting times as the factors, orthogonal test was designed to optimize the extraction

conditions of Zhiqiao dispensing granules and proved; naringin and neohesperidin contained in Zhiqiao dispensing

granules were identified qualitatively by TLC; the contents of naringin and neohesperidin contained in Zhiqiao dis­

pensing granules were measured using HPLC. Results: The optimal extraction process of Zhiqiao dispensing gran­

ules is that adding ten times of water to the decoction pieces, extracting three times, one hour each time; the samples

showed the spots of the same color in the corresponding site of TLC of the control article; naringin and neohes­

peridin presented better linearity in the range between 42.823 8 and 781.181 2, 45.567 0 and 729.072 0 mg/L (r was

0.999 9), RSD of precision tests were 1.05% and 0.64%(^=6) respectively, RSD of stability tests were 1.43% and

1.08%(a=6) respectively, RSD of repeatability tests were 0.72% and 0.64% respectively(Ai=6), average recovery rates

were 96.26% and 97.23% respectively (RSD were 0.69% and 0.37% respectively, n=9); among three batches of the

samples, the contents of naringin were from 93.614 to 99.016 mg/g; the contents of neohesperidin were from 75.046

to 78.816 mg/g. Conclusion: The optimized extraction technology is stable, the established quality standard for

Zhiqiao dispensing granules is simple, rapid and accurate, and it could be used for quality control.

Keywords

Zhiqiao; dispensing granules; technology; quality; naringin; neohesperidin

枳壳为芸香科植物酸澄oura/Uium L.

及其栽培变种的干燥未成熟果实,性味苦、辛、酸,

微寒，归脾、胃经，具有理气宽中，行滞消胀的功

效，常用于治疗胸胁气滞、胀满疼痛、食积不化、痰

饮内停、脏器下垂等[1]。枳壳含有黄酮类成分和

挥发油成分，黄酮类成分包括橙皮苷、新橙皮苷、

柚皮苷、酸橙素等[2-3]。现对枳壳配方颗粒提取工

艺和质量进行研究。

承却彳表态2020年第卷第"期

中药配方颗粒采用现代中药提取技术，对中

药饮片进行提取、浓缩、干燥、制粒，具有便于临床

调剂和服用方便的特点，枳壳配方颗粒以《中华人

民共和国药典》「1]规定的枳壳饮片为原料，通过

提取、过滤、浓缩、干燥及制粒等流程制成,其性味

归经，功能主治与枳壳相同[4_8]，本试验参照2015

版《中华人民共和国药典》[1]中枳壳的定性定量

质量标准，对枳壳配方颗粒质量进行研究，为枳壳

配方颗粒的质量控制提供依据。

I材料

1.1仪器UltiMate 3000系列高效液相色谱

仪(包括LPG-3400SDN四元梯度泵,WPS-3000SL自

动进样器，TCC-3000RS柱温箱，VWD-3100检测器，

美国赛默飞公司）；Diamonsil C18色谱柱(4.6mmx

250 mm，5 |xm,迪马科技公司）；AB135_S型电子天平

(瑞士梅特勒公司）；ELGA 0ption_Q型纯水机（威

立雅集团公司）。

1.2药品与试剂枳壳配方颗粒(劲牌生物医药

表1

水平

1

2

3

A (提取次数）（次)

1

2

3

方药•展養分料

有限公司，批号：20181101、20181102、20181103,

规格:2. 5 g/袋，当量2.0),柚皮苷对照品(含量94 ：%

批号:110722-201613)、新橙皮苷对照品(含量99.6%,

批号：111857-201102),对照品均购自中国食品药

品检定研究院。乙腈、磷酸为色谱纯;其他试剂均

为分析纯;水为超纯水。

1.3药材枳壳饮片（湖北辰美中药有限公司，

批号=707200,经中国医学科学院药用植物研究所

郭宝林教授鉴定为芸香科植物酸橙CiiriM aura/i«iwm

L.的干燥未成熟果实）；枳壳饮片新橙皮苷含量为

3.46%。

2方法与结果

2.1枳壳提取工艺优化

2. 1.1试验因素水平通过查阅文献确定了影

响枳壳提取的3个主要因素:提取次数(A)、提取

倍数(B)、提取时间(C),为优选各因素最佳工艺水平，

以新橙皮苷转移率和出膏率为指标，采用L9(34)

正交试验对各影响因素进行考察,因素水平见表1。

正交试验因素水平

因素

C (提取时间）（h)

1

1. 5

2

D(空白）

1

2

3

B (提取倍数）（倍）

6

8

10

2. 1.2正交试验称取枳壳药材各30 g，共9份，

采用L9(34)正交表安排试验，测定干膏粉重量和

新橙皮苷含量，计算出膏率和新橙皮苷提取转

表2

编号样品重量(g)

1

2

3

4

5

6

7

8

9

Kx

k

移率，结果见表2,对新橙皮苷转移率进行方差分

析，结果见表3。

正交试验结果

D

1

2

3

3

1

2

2

3

1

0. 612

0. 592

0. 555

0. 057

出膏率(w

10. 5

14. 3

18. 4

21. 9

28. 7

27. 5

36. 0

31.4

37. 8

新橙皮苷含量(%)

7.602 1

8.735 8

8.822 0

7. 160 8

8.203 5

8.928 9

6. 780 4

8. 183 6

8.462 6

转移率(%)

23. 05

36. 18

46. 84

45.40

68. 04

70. 96

70. 60

74. 30

92. 48

因素

A

1

1

1

2

2

2

3

3

3

0. 354

0. 615

0. 791

0. 437

B

1

2

3

1

2

3

1

2

3

0. 463

0. 595

0. 701

0. 238

C

1

2

3

2

3

1

3

1

2

0. 561

0. 580

0. 618

0. 057

30. 03

30. 29

30. 00

30. 41

30. 32

30. 01

30. 15

30. 09

30. 13

2

K,

R

注：出膏率(%)=干膏粉重量(g)/提取用饮片重量(g) xl〇〇%;新橙皮苷转移率(%)=[干膏粉重量（g) x

干膏粉新橙皮苷含量《)]"提取用饮片重量(g) X饮片新橙皮苷含量(%) ] X 100%

中阁科忟 49

y

«

A

方药•烕罨分料

表3

因素

A

B

C

误差

偏差平方和

0. 291

0. 085

0. 005

0. 01

方差分析结果（a=0. 05)

自由度

2

2

2

2

F

58. 200

17. 000

1. 000

尸临界值

19. 000

19. 000

19. 000

P

0. 017

0. 056

0. 495

Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2020 Vol.33 No. 11

由表2—3结果可知,A具有显著性，影响新

橙皮苷提取各因素的影响大小分别为A>B>C,

结合生产实际情况，综合分析各因素对新橙皮苷

转移率的影响，确定最佳工艺为A3B3C,，即10倍量

水，提取3次，每次1小时。

2. 1. 3提取工艺验证称取枳壳饮片200 g,按

照正交试验所得最佳工艺进行提取,重复验

证3批，测得提取出膏率为40. 51%~41. 03%，RSD为

0. 68%,新橙皮苷提取转移率为88. 74%~93. 44%,

RSD为2. 6%，说明提取工艺稳定，可作为枳壳配方

颗粒提取工艺，见表4。

表4

序号

1

2

3

药材(g)

200. 16

200. 01

200. 11

出膏率（%)

40. 94

40. 51

41. 03

提取工艺验证结果

枳壳配方颗粒

含量(%)

7. 50

7. 75

7. 88

转移率(%)

88. 74

90. 74

93. 44

注：1~3供试品溶液

,

4柚皮苷对照品

，

5新橙皮苷对照

品，6阴性

图1薄层色谱图

2.3检查

2. 3. 1水分测定取本品3批(批号：20181101、

20181102、20181103)进行水分测定，参照《中国药

典》四部[2 ] _通则〇832 ”项下水分测定法的第一

法进行测定。结果枳壳配方颗粒水分含量分别为

7. 65%、7. 71%、7. 69%,符合药典四部“颗粒剂”项下

水分彡8.0%的要求。

2. 3. 2粒度测定取本品3批(批号：20181101、

20181102、20181103)，参照《中国药典》四部[2]133

“通则0982”项下双筛分法测定。结果枳壳配方颗

粒的粒度分别为11. 24%、11. 32%、11. 18%,符合药

典四部“颗粒剂”项下粒度不得超过15%的要求。

2.3. 3溶化性测定取本品3批(批号:20181101、

20181102、20181103),分别取供试品10 g，加热水

200 mL，搅拌5分钟，立即观察。结果枳壳颗粒溶

液清澈无异物或焦肩，符合《中国药典》四部[2]8

“颗粒剂”项下溶化性要求。

2. 3. 4浸出物测定取本品3批(批号:20181101、

20181102、20181103),取各批次枳壳配方颗粒研细，

取4 g粉末，按照《中国药典》四部12 ] 202“浸出物测

定法”项下热浸法，以乙醇作为溶剂进行测定。结

果醇溶性浸出物的含量分别为48. 77%、48. 69%、

47. 73%,因此暂定枳壳配方颗粒浸出物为47. 73%~

48.77%。

2.4柚皮苷、新橙皮苷含量测定

2.4.1 色谱条件色谱柱：Diamonsil CI8色谱

柱（4. 6 mmx250 mm, 5 (xm);流动相：乙腈-水（20:

80,V/V);流速：1. 0 mL/min;检测波长：283 nm;柱

温:25°C;进样量：10 |xL。

2. 4. 2 对照品溶液的制备

2.4.2. 1柚皮苷对照品溶液精密称取柚皮苷

2. 1.4枳壳配方颗粒制备称取枳壳饮片3 kg,

按照正交试验所得最佳工艺A3BA进行提取，将

药材置于提取容器中，加入10倍量水，提取3次，每

次1小时，收集滤液，将滤液浓缩，喷雾干燥，制粒，

得到3批枳壳配方颗粒，每批约1.2 kg (批号：

20181101、 20181102、20181103)。根据《中国药

典》[2]72015版第四部“通则0104颗粒剂”的相关

规定，对枳壳配方颗粒的质量标准进行研究。

2. 2定性鉴别取本品3批（批号：20181101、

20181102、 20181103)，分别取粉末0. 2 g，加甲醇

10 mL,超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干,残渣加

甲醇5 mL使溶解，作为供试品溶液。取柚皮苷对

照品、新橙皮苷对照品，分别加甲醇制成每1 mL各

含0. 5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱

法（通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10

jjl

L、

对照品溶液20 分别点于同一硅胶G薄层板上,

以三氯甲烷-甲醇-水（13:6:2)下层溶液为展开

剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，

105°C加热约5分钟，置紫外光灯（365 nm)下检

视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，

呈相同颜色的荧光斑点，见图1。

+ @糾抆

2020年第卷第//期

方药•焦省分料

粒，研细（粉末过二号筛），再取粉末0. 2 g，精密称

定，置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50mL,称定重量，

加热回流1. 5小时，放冷，再称定重量，用甲醇补

足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，

置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，过滤，作为

供试品溶液。

2.4.4系统适用性试验取“2. 4. 2”项下对照品

溶液和“2. 4. 3,下供试品溶液(批号:20181101),

分别按“2.4. 1”项下条件进样，记录色谱图。结果

相邻峰间分离度大于1.5,柚皮苷和新橙皮苷计

理论板数均在3 000以上，色谱图见图2。

对照品41. 42 mg至25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并

定容，摇匀，制成柚皮苷质量浓度为1 656. 8 mg/L

的对照品溶液。

2. 4. 2. 2新橙皮苷对照品溶液精密称取新橙

皮苷36. 60 mg至25 mL容量瓶中，加甲醇溶解并

定容，摇匀，制成柚皮苷质量浓度为1 464 mg/L的

对照品溶液。

2. 4. 2. 3混合对照品溶液精密量取上述单一

对照品溶液等量，置于同一量瓶中，制成柚皮苷、

新橙皮苷质量浓度分别为828. 4、732 mg/L的混

合对照品溶液。

2. 4. 3供试品溶液的制备

柚

皮

取适量枳壳配方颗

，

新攆皮苷

i

时间（m

in)

混合对赛品溶液

图2混合对照品和供试品HPLC色谱图

供试品

2.4. 5线性关系考察分别毛甲醇将“J 2. 4. 2”项 时后分别按“2.4. 1”项下条件进样，记录峰面积。

结果柚皮苷和新橙皮苷峰面积的RSD分别为

1. 43%、1. 08% U=7)，表明供试品溶液在室温条件

下24小时内稳定性良好。

2.4.9样品含量测定分别称取3批供试品，按

“2. 4. 3”项下方法制备供试品溶液，按“2. 4. 1”项

下条件进样，记录峰面积，结果表明本品3批样品

含量稳定，柚皮苷含量为93. 614~99. 016 mg/g,新

橙皮苷含量为75. 046~78. 816 mg/g，见表5。

表5样品中柚皮苷和新橙皮苷含量测定结果tng/g

丨浓度，按“2.4. 1”项

下混合对照品溶液稀释一系歹I

下条件进样并进行HPLC分析

，记录峰面积，以对

照品溶液的质量浓度为横坐标

U*)、峰面积为纵坐

:及新橙皮苷的回归

标(y)进行回归分析，得柚皮苷

方程分别为：

j=0. 290 6^+0. 553 8 (r=0. S 199 9)

y=0. 3113 *+0.702 7 〇■=0•!

399 9)

结果表明，柚皮苷和新橙方

E苷检测质量浓度分

57 0-729. 072 0 mg/L

别在 42. 823 8~781.181 2、45. 51

范围内线性关系良好。

2.4.6精密度试验精密吸！

仅“2. 4. 2”项下各单

一对照品溶液10 pL，按“2. 4.

1”项下条件连续进

r

苷和新榕崁苷峰而

样6次，记录峰面积。结果柚皮

积的RSD分别为1. 05%、0. 64%(n=6),表明仪器精

密度良好。

2.4.7重复性试验精密称取同一供试品（批

号420181101)0.2 8，共6份，按“2.4.3”项下方

法制备供试品溶液，再按“2. 4.1”项下条件进样，

记录峰面积。结果柚皮苷和新橙皮苷峰面积的

RSD分别为0. 72%、0. 64%(ra=6)，表明重复性良好。

2.4.8稳定性试验取同一供试品溶液（批号：

P20181101)，在室温下放置 0、3、6、9、12、18、24 小

批号

P20181101

P20181102

P20181103

柚皮苷

99. 016

97. 683

93. 614

新橙皮苷

75. 046

77. 526

78. 816

2. 4. 10加样回收率试验精密称取9份已知柚

皮苷和新橙皮苷含量的枳壳配方颗粒粉末各〇. 2 g

(批号：P20181101)，分别精密加入柚皮苷和新橙

皮苷对照品溶液适量，按照“2. 4. 3”项下方法制备

供试品溶液，按照“2.4. 1”项下条件进样，记录峰

面积并计算平均加样回收率。结果柚皮苷、新橙皮

苷平均加样回收率分别为96. 26%、97. 23%,RSD分

别为0. 69%、0. 37% (n=9)，表明仪器准确度良好，

见表6。

a

m

-

h

方药•焦嚷令料

表6

对照品

样品中量(mg)

4. 9166

4. 9541

4. 9600

5. 1448

柚皮苷

5. 1419

5. 1943

5. 2190

5. 2120

5. 2960

3. 6799

3. 7080

3. 7124

3. 8508

新橙皮苷

3. 8486

3. 8878

3. 9062

3. 9011

3. 9639

加样量(mg)

3. 9889

3. 9889

3. 9889

4. 9462

4. 9462

4. 9462

5. 9833

5. 9833

5. 9833

2. 9593

2. 9593

2. 9593

3. 6991

3. 6991

3. 6991

4. 4390

4.4390

4. 4390

Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2020 Vol.33 No.11

加样回收率(

n

=9)

测得量(mg)

8.7888

8.8372

8.8147

9. 9017

9.9074

9.9132

10.9347

10.9588

11.0263

6.5518

6. 5774

6.5771

7.4658

7.4607

7.4706

8.2290

8.2336

8.2714

回收率《)

97. 07

97. 35

96. 64

96. 17

96. 35

95. 40

95. 53

96. 05

95. 77

97. 05

96. 96

96. 80

97. 73

97. 65

96. 86

97. 38

97. 60

97. 04

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35-44. *

收稿日期=2018-11-28

*基金项目：湖北省技术创新专项重大项目（2018ACA125).

作者简介：贺友安（1982—），男，硕士学位，高级工程师.研究

方向：中药资源与制剂研究.

97. 23

0. 37

96. 26

0. 69

均值W)

RSD 值(%)

3讨论

本实验参考相关文献>18]，采用正交试验法

对枳壳配方颗粒的制备工艺进行了优化，确定了

最佳提取工艺，即10倍量水，提取3次，每次1小

时，平均出膏率40.83%,新橙皮苷平均转移率90.97%,

该工艺稳定可靠，可以为枳壳配方颗粒的生产提

供指导。

本研究采用高效液相色谱法同时测定了枳壳

配方颗粒中柚皮苷和新橙皮苷的含量，对该方法

的系统适用性、线性关系、精密度、重复性、稳定性、

加样回收率进行了考察，结果表明该方法针对性

强，效果好，可用于枳壳配方颗粒中柚皮苷和新橙

皮苷的检测，根据枳壳配方颗粒质量标准限度值按测

定结果平均值的80%计算,3批验证试验样品柚皮

音含量为 91614~99_ 016 mg/g，平均含量 96.771mg/g，

新橙皮苷含量为75. 046~78. 816 mg/g，平均含量

77. 129 mg/g，拟定枳壳配方颗粒标准中柚皮苷不

得少于77. 4 mg/g，新橙皮苷不得少于61. 7 mg/g。

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