2024年3月31日发(作者:富士山下)
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描述
ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Kit 包含了足够25个与c-Myc –标签蛋白IP或Co-IP的成分,包括10个
c-Myc –标签阳性对照的实验
试剂盒成分:
Immobilized Anti-c-Myc, 62.5 g固定的珠状琼脂加上125g 抗体,以含25%的溶液和0.1%叠氮钠的PBS
的形式提供(总体积为250ul)。
BupH™ Tris Buffered Saline Pack, 一个包装,用500 ml超纯水稀释后,溶液成分为25 mM Tris, 0.15 M
NaCl, pH 7.2
Elution Buffer, 50 ml, pH 2.8
Lane Marker Non-Reducing Sample Buffer (5X), 5 ml, 包含0.3 M Tris•HCl, pH 6.8, 5% SDS, 50% 甘油,
电泳指示剂。
Handee™ Spin Columns Accessory Pack, 含提前放置好的玻璃原料,顶盖和底盖的27
Collection Tubes and Caps Accessory Pack, 100 有刻度的2 ml 管子和塞盖
c-Myc-tagged Positive Control, 500ul,1 mg/ml E. coli 提取的包含c-Myc-标签GST(古胱氨酸S-转移
酶)
储藏: 收到后,将c-Myc-标签阳性对照放在-80度冰箱,(在-20度可放6个月),将其他所用到的成分
放在4度,c-Myc-标签阳性对照用干冰运输。
注意: ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Kit是ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Application Set (23622) 和
c-Myc-tagged Positive Control (23633)的联合体。
介绍
ProFound™ c-Myc Tag IP/Co-IP Kit与用蛋白A/G琼脂糖的IP方法相比,传统的提供了一个简单快速
的方法来研究c-Myc-标签蛋白。高亲和性的抗c-Myc抗体相连的琼脂糖使得c-Myc标签蛋白和其相互作
用的不含抗体的成分的IP和Co-IP。Handee™离心管能使其产物带有小体积的固定抗c-Myc(抗c-Myc琼
脂糖),并能够在整个过程中作为一个单独的离心管,防止在洗脱的时候抗c-Myc琼脂糖的损失。
Handee™离心管通过有效的分离Buffer,进一步加强了从抗c-Myc琼脂糖的回收率。
抗原表位标记使得其识别标签特异性的融合蛋白而不是蛋白特异性抗体。抗原表位标记蛋白的IP
能用来确定的蛋白细胞定位,并研究翻译后的修饰或检测标记蛋白质和其他蛋白质之间的相互作用。c
- myc标签由源自人类c - myc蛋白C端的十个氨基酸(EQKLISEEDL)组成。c-Myc标签蛋白的IP是用抗
c-Myc标签抗体来识别来自于天然蛋白的表达蛋白。
ProFound™ c-Myc-Tag IP/Co-IP Kit用了高亲和力的抗c-Myc标签抗体使得标签蛋白的分离和鉴定
不受其表达水平的限制。抗体和琼脂糖之间的共价连接导致了IP产物免受抗体的污染。c-Myc标签阳性
对照用来验证IP和抗c-Myc标签琼脂糖。Handee™离心管有利于在IP/Co-IP过程中c-Myc标签琼脂糖的
完全保留,并使因为c-Myc标签琼脂糖损失造成的实验误差达到最小(请看附录中与试剂盒相关的离
心管图标和数据)。
步骤简介
重要的产品信息
为了得到最好的结果,在尝试IP之前,需要确定含c-Myc标签融合蛋白表达的合适实验条件。
试剂盒提供的buffer使得有足够的灵活度来确定分离相互作用蛋白的最适条件。相互作用蛋白的特点可
能需要改变结合和洗脱buffer。蛋白共因子,二价阳离子,洗涤剂或附加的盐离子可能会用到。
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