2024年3月12日发(作者：诺基亚新手机)
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Fax:
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SPSepharose6FF重力柱说明书
货号：
YA2530
规格：
1*1mL/1*5mL/5*1mL/3*1mL+1*5mL/5*5mL
保存：
2-8℃
产品说明：
SPSepharose6FF
是一种强阳离子交换树脂，离子交换基团
-O-CH
2
CH
2
CH
2
SO
3
-
，本产品以高交
联的
6%
琼脂糖为介质，可耐受较高的流速及更高的化学稳定性，适合实验室及工业大规模纯化。
离子交换树脂广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。
表
1
：介质性能参数
基质
离子交换类型
离子载量
粒径(μm)
建议流速
pH
稳定范围
储存缓冲液
高度交联的
6%
琼脂糖微球
强阳离子
约0.18-0.25mmolH
+
/ml介质
45-165
400-700cm/h
4-13
20%
乙醇
纯化流程：
1、Buffer的准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。
所使用的平衡液和洗脱液，根据不同离子交换填料自行选择基。本原则是低盐上样，高盐洗脱。
2、样品准备
样品在上样前建议离心或用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止
堵塞柱子。
3、样品纯化
SPSepharose6FF重力柱使用请参考以下说明，各溶液用量均按照柱体积计算（柱体积是指填
料的体积）。使用流程请参考下图。
Step1：柱子平衡；Step2：上样；Step3：洗杂；Step4：洗脱
1)
水洗：将SPSepharose6FF重力柱固定在铁架台上，依次去掉上端塞和下端塞，使液体流出。
第
1
页共
2
页
当柱内剩余液面略高于上筛板，用
5
个柱体积的去离子水清洗填料，去除保护液。
2)
平衡：当液面略高于上筛板，向柱管中加入至少
5
个柱体积的平衡液，进行平衡，使填料处
于与目的蛋白相同的缓冲体系下，起到保护蛋白的作用。
3)
上样：将样品加到平衡好的重力柱中，样品保留时间至少
2min
，保证目的蛋白与介质充分
接触，提高目的蛋白的回收率。收集流出液，用于
SDS-PAGE
分析蛋白质的结合情况，在出现问题时，
更方便寻找解决问题的方案。
4)
洗杂：用
10-15
倍柱体积的洗杂液进行清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。
5)
洗脱：采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中，通常
5-10
倍柱体积洗脱液就足够了。梯
度洗脱可以选用
20
倍柱体积或更多，来分离不同结合强度的蛋白质。
6)
水洗：用
2-3
倍柱体积的
1MNaCl
溶液甚至更高离子强度溶液或高
pH
溶液清洗，然后用
5-10
倍柱体积的去离子水冲洗填料，最后再用
5
倍柱体积的
20%
的乙醇平衡，然后保存在等体积的
20%
的乙
醇中，置于
4
℃保存，防止填料被细菌污染。
4
、
SDS-PAGE
检测
将纯化过程中收集的样品（包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分）以及原始样品使用
SDS-PAGE
检测纯化效果。
5
、填料清洗
离子交换树脂可以重复使用而无需再生，但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往
往造成流速和结合载量都下降，这时可按照下面方法对树脂进行清洗。
去除一些沉淀或变性物质，建议使用下面的方法
用
2
倍柱体积的
1MNaOH
溶液进行清洗，然后立即用
5
倍柱体积的
PBS
，
pH7.4
清洗。
去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用
3-4
倍柱体积的
70%
乙醇或
3-4
倍柱体积的
1%TritonX-100
清洗，然后立即用
5
倍柱体积的
PBS
，
pH7.4
清洗。
去除一些离子键结合物质
用
3-4
倍柱体积的
2MNaCl
清洗，然后立即用
5
倍柱体积的
PBS
，
pH7.4
清洗。
备注：备注：
20%
乙醇可以防止微生物的生长，
20%
乙醇保存的介质储存在
2-8
℃。
常见问题
问题原因分析原因分析推荐解决方案
进行树脂清洗
柱子反压过高填料被堵塞
裂解液中含有微小的固体颗粒，建议
上柱前使用滤膜(0.22或0.45μm)
过滤，或者离心去除。
进行树脂清洗或更换新树脂
增加洗杂液体积，确保树脂充分平衡
/洗杂
优化洗脱条件
树脂重复多次使用
洗脱样品较杂
洗杂不充分
样品带电性能相似
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